第一部分慢病毒介導(dǎo)的MAPK基因沉默對雌二醇作用子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa的影響1慢病毒shRNA載體構(gòu)建并建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的Ishikawa細(xì)胞株[目的]本課題組前期發(fā)現(xiàn)雌二醇可以通過MAPK信號通路促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展,為明確MAPK信號通路對雌二醇作用子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的相關(guān)機(jī)制,我們利用RNAi沉默子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa中的MAPK基因,并篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株,為探究MAPK基因低表達(dá)對雌二醇作用子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的影響奠定基礎(chǔ)。[方法]（1）設(shè)計(jì)合成4組特異性針對MAPK基因的siRNA,構(gòu)建shRNA質(zhì)粒載體,感染Ishikawa細(xì)胞。（2）利用RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)檢測各組對目的基因的抑制效果,篩選出沉默效果最佳的靶點(diǎn)。（3）將選取的最佳靶點(diǎn)包裝成慢病毒shRNA載體,感染Ishikawa細(xì)胞。（4）將感染目的基因的細(xì)胞Ishikawa,經(jīng)流式分選獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株,采用RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)檢測各組對目的基因的抑制效果。[結(jié)果]（1）RT-PCR和Western blot篩選出最佳干擾靶點(diǎn),siRNA序列為:GGACTGTC... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ｐＧＦＰ－Ｖ－ＲＳ質(zhì)粒載體??

圖１－２慢病毒載體??

表１?－３?ＭＡＰＫ質(zhì)粒ｓｈＲＮＡ序列信息表??Ｔａｂｌｅ?１－３?ＭＡＰＫ?ｓｈＲＮＡ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｔａｂｌｅ??組別?ｓｈＲＮＡ序列信息??ＭＡＰＫ－ｐＧＦＰ－??Ｖ－ＲＳ?１?組?－ＡＡＴＴＣＡＡＡＡＧＧＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＡＧＡＧＡＴＧＧＣＧＧＴＧ－３’??ＭＡＰＫ－ｐＧＦＰ－?５?’??Ｖ－ＲＳ?２?組?－ＣＣＧＧＧＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＡＧＡＧＡＴＧＧＣＧＧＴＴＧＧＧＴＴＴ?Ｇ；３Ｉ４．２質(zhì)粒轉(zhuǎn)染??ＭＡＰＫｓｈＲＮＡ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Ｉｓｈｉｋａｗａ細(xì)胞４８小時(shí)后，即可以在熒光顯微下觀察到轉(zhuǎn)染了?ＭＡＰＫｓｈＲＮＡ質(zhì)粒的Ｉｓｈｉｋａｗａ細(xì)胞呈現(xiàn)出綠色熒光，如１－４所示，可以進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雌激素通過激活A(yù)KT通路產(chǎn)生的細(xì)胞因子增強(qiáng)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖能力[J]. 陸媛媛,張潔清,梁少鳳,李力.  中國癌癥雜志. 2013(11)
[2]雌二醇對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞AKT通路中細(xì)胞因子的影響[J]. 丁蘭芳,王曉謙,陸媛媛,宋紅林,李力,張潔清.  中國腫瘤臨床. 2011(20)
[3]AKT2-siRNA對肺癌細(xì)胞NCI-H446沉默作用的研究[J]. 曹婷婷,張茂林,趙國強(qiáng),盧濱,王靜.  中國肺癌雜志. 2008(04)
[4]siRNA理性設(shè)計(jì)原理分析[J]. 方翔,曹以誠,杜正平,郭旭,卓敏.  生命的化學(xué). 2007(04)
[5]蛋白質(zhì)組學(xué)在肺癌診治研究中的應(yīng)用[J]. 戴明,羅榮城.  癌癥. 2007(06)
[6]磷酸化蛋白質(zhì)分析技術(shù)在蛋白質(zhì)組研究中的應(yīng)用[J]. 王京蘭,錢小紅.  分析化學(xué). 2005(07)
[7]用蛋白質(zhì)組學(xué)方法解析磷酸化蛋白質(zhì)[J]. 章曉鵬,肖志強(qiáng),陳主初.  生命的化學(xué). 2005(03)
[8]磷酸酪氨酸蛋白專一抗體的制備和純化[J]. 朱曙東,趙文君,張光毅.  生物化學(xué)雜志. 1997(05)



本文編號：3391909