在我國(guó)水稻育種中,品質(zhì)改良已成為了攻關(guān)的熱點(diǎn)。在水稻品質(zhì)性狀中,糯性和香味是水稻的特殊品質(zhì),CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的發(fā)展和成熟為糯性和香味的改良提供了高效的技術(shù)手段。本研究利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù),分別針對(duì)雜交水稻親本材料209B和Y58S進(jìn)行糯性和香味的改良,分別對(duì)負(fù)調(diào)控直鏈淀粉含量基因Wx和稻米香味基因Badh2進(jìn)行定點(diǎn)基因編輯,獲得新型的優(yōu)良雜交水稻親本材料。有關(guān)研究結(jié)果如下:1、水稻材料209B中的Wx位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)編輯,針對(duì)Wx基因選擇合適的靶位點(diǎn),參與構(gòu)建sgRNA表達(dá)盒,并pYLCRISPR/Cas9載體連接;單靶點(diǎn)載體利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化水稻材料209B;對(duì)T0、T1代轉(zhuǎn)化植株定點(diǎn)編輯位置進(jìn)行PCR檢測(cè)和測(cè)序分析,分別測(cè)定轉(zhuǎn)化植株精米直鏈淀粉含量,篩選出無(wú)外源轉(zhuǎn)化元件的純合突變體。結(jié)果表明,T0代209B突變材料中Wx位點(diǎn)的突變頻率高達(dá)66.7%,其中純合缺失突變率表型為直鏈淀粉在4%以下占33.3%;2、水稻材料Y58S中的Badh2位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)編輯,針對(duì)Badh2基因選擇合適的靶位點(diǎn),參與構(gòu)建sgRNA表達(dá)盒與pYLCRISPR/Cas9載體連... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２靶標(biāo)ｓｇＲＮＡ表達(dá)盒排列??．－ｒ

３．１水稻材料中兩個(gè)品質(zhì)性狀基因靶位點(diǎn)檢測(cè)??分別比對(duì)水稻材料候選基因中的靶位點(diǎn)與設(shè)計(jì)的相關(guān)靶點(diǎn)引物堿基序列進(jìn)行ＰＣＲ??擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)水稻材料２０９Ｂ的奶：基因靶位點(diǎn)堿基序列與其靶點(diǎn)序列對(duì)比一致（圖３－１、??３－２），水稻材料Ｙ５８Ｓ的洲２基因靶位點(diǎn)堿基序列與其靶點(diǎn)序列對(duì)比一致（圖３－３、??３－４?和?３－５）。??ｐｒｉｍｅｒ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ??ＴＣＣＧＣＸ＇ＡＣＧＧＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＧＣＣＣＣＧＣＡＧＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＧ??ＡＣＧＴＣＧＣＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＧＡＣＣＡＧＣＧＣＧＣＧＣＧＣＧＡＣＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＧＴＣ??ＧＧＴＧＣＡＧＣＧＴＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡ

３．１水稻材料中兩個(gè)品質(zhì)性狀基因靶位點(diǎn)檢測(cè)??分別比對(duì)水稻材料候選基因中的靶位點(diǎn)與設(shè)計(jì)的相關(guān)靶點(diǎn)引物堿基序列進(jìn)行ＰＣＲ??擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)水稻材料２０９Ｂ的奶：基因靶位點(diǎn)堿基序列與其靶點(diǎn)序列對(duì)比一致（圖３－１、??３－２），水稻材料Ｙ５８Ｓ的洲２基因靶位點(diǎn)堿基序列與其靶點(diǎn)序列對(duì)比一致（圖３－３、??３－４?和?３－５）。??ｐｒｉｍｅｒ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ??ＴＣＣＧＣＸ＇ＡＣＧＧＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＧＣＣＣＣＧＣＡＧＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＧ??ＡＣＧＴＣＧＣＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＧＡＣＣＡＧＣＧＣＧＣＧＣＧＣＧＡＣＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＧＴＣ??ＧＧＴＧＣＡＧＣＧＴＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因組編輯技術(shù)及應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 孫玉章,孫明軍,代永聯(lián),尹仁福,丁壯.  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2016(12)
[2]基于CRISPR/Cas9技術(shù)的水稻千粒重基因tgw6突變體的創(chuàng)建[J]. 王加峰,鄭才敏,劉維,羅文龍,王慧,陳志強(qiáng),郭濤.  作物學(xué)報(bào). 2016(08)
[3]植物CRISPR/Cas9基因組編輯系統(tǒng)與突變分析[J]. 馬興亮,劉耀光.  遺傳. 2016(02)
[4]不同類型水稻品種Wx基因多態(tài)性位點(diǎn)的鑒定及其與直鏈淀粉含量的關(guān)系[J]. 盛文濤,周麗潔,吳俊,柏斌,鄧啟云.  雜交水稻. 2015(05)
[5]Differential expressions among five Waxy alleles and their effects on the eating and cooking qualities in specialty rice cultivars[J]. ZHOU Li-jie,SHENG Wen-tao,WU Jun,ZHANG Chang-quan,LIU Qiao-quan,DENG Qi-yun.  Journal of Integrative Agriculture. 2015(06)
[6]雙波長(zhǎng)法測(cè)定糯米粉支鏈淀粉的含量[J]. 黃巖,張燕萍.  食品科技. 2014(07)
[7]稻米食味品質(zhì)的影響因素及中國(guó)秈稻食味品質(zhì)改良存在的問(wèn)題與策略[J]. 盛文濤,吳俊,姚棟萍,莊文,鄧啟云.  雜交水稻. 2014(03)
[8]寒地水稻直鏈淀粉含量測(cè)定方法的研究[J]. 馬文東,李修平,張獻(xiàn)國(guó),張?jiān)平?郭亞晉,李智媛.  黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(02)
[9]糯稻wx基因的遺傳分析[J]. 陳培峰,王建平,喬中英,朱勇良.  江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(07)
[10]雙波長(zhǎng)法測(cè)定秈米中直鏈淀粉和支鏈淀粉含量[J]. 蔣卉,胡中澤.  糧食與飼料工業(yè). 2013(02)

碩士論文
[1]水稻胚性愈傷組織分化相關(guān)基因的研究[D]. 賈春陽(yáng).華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]水稻Sa座位控制反溫敏不育機(jī)理的研究及應(yīng)用[D]. 劉偉.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]利用Wx和fgr基因功能性標(biāo)記改良稻米重要品質(zhì)性狀[D]. 周屹峰.浙江大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3391839