在我國水稻育種中,品質(zhì)改良已成為了攻關(guān)的熱點(diǎn)。在水稻品質(zhì)性狀中,糯性和香味是水稻的特殊品質(zhì),CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的發(fā)展和成熟為糯性和香味的改良提供了高效的技術(shù)手段。本研究利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù),分別針對雜交水稻親本材料209B和Y58S進(jìn)行糯性和香味的改良,分別對負(fù)調(diào)控直鏈淀粉含量基因Wx和稻米香味基因Badh2進(jìn)行定點(diǎn)基因編輯,獲得新型的優(yōu)良雜交水稻親本材料。有關(guān)研究結(jié)果如下:1、水稻材料209B中的Wx位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)編輯,針對Wx基因選擇合適的靶位點(diǎn),參與構(gòu)建sgRNA表達(dá)盒,并pYLCRISPR/Cas9載體連接;單靶點(diǎn)載體利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化水稻材料209B;對T0、T1代轉(zhuǎn)化植株定點(diǎn)編輯位置進(jìn)行PCR檢測和測序分析,分別測定轉(zhuǎn)化植株精米直鏈淀粉含量,篩選出無外源轉(zhuǎn)化元件的純合突變體。結(jié)果表明,T0代209B突變材料中Wx位點(diǎn)的突變頻率高達(dá)66.7%,其中純合缺失突變率表型為直鏈淀粉在4%以下占33.3%;2、水稻材料Y58S中的Badh2位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)編輯,針對Badh2基因選擇合適的靶位點(diǎn),參與構(gòu)建sgRNA表達(dá)盒與pYLCRISPR/Cas9載體連... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２靶標(biāo)ｓｇＲＮＡ表達(dá)盒排列??．－ｒ

３．１水稻材料中兩個品質(zhì)性狀基因靶位點(diǎn)檢測??分別比對水稻材料候選基因中的靶位點(diǎn)與設(shè)計(jì)的相關(guān)靶點(diǎn)引物堿基序列進(jìn)行ＰＣＲ??擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)水稻材料２０９Ｂ的奶：基因靶位點(diǎn)堿基序列與其靶點(diǎn)序列對比一致（圖３－１、??３－２），水稻材料Ｙ５８Ｓ的洲２基因靶位點(diǎn)堿基序列與其靶點(diǎn)序列對比一致（圖３－３、??３－４?和?３－５）。??ｐｒｉｍｅｒ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ??ＴＣＣＧＣＸ＇ＡＣＧＧＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＧＣＣＣＣＧＣＡＧＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＧ??ＡＣＧＴＣＧＣＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＧＡＣＣＡＧＣＧＣＧＣＧＣＧＣＧＡＣＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＧＴＣ??ＧＧＴＧＣＡＧＣＧＴＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡ

３．１水稻材料中兩個品質(zhì)性狀基因靶位點(diǎn)檢測??分別比對水稻材料候選基因中的靶位點(diǎn)與設(shè)計(jì)的相關(guān)靶點(diǎn)引物堿基序列進(jìn)行ＰＣＲ??擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)水稻材料２０９Ｂ的奶：基因靶位點(diǎn)堿基序列與其靶點(diǎn)序列對比一致（圖３－１、??３－２），水稻材料Ｙ５８Ｓ的洲２基因靶位點(diǎn)堿基序列與其靶點(diǎn)序列對比一致（圖３－３、??３－４?和?３－５）。??ｐｒｉｍｅｒ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ??ＴＣＣＧＣＸ＇ＡＣＧＧＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＧＣＣＣＣＧＣＡＧＣＣＣＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＧ??ＡＣＧＴＣＧＣＴＣＡＧＣＧＴＧＡＣＧＡＣＣＡＧＣＧＣＧＣＧＣＧＣＧＡＣＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＧＴＣ??ＧＧＴＧＣＡＧＣＧＴＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3391839