發(fā)布時(shí)間：2021-09-07 19:18

　　大豆胞囊線蟲是大豆生產(chǎn)中經(jīng)濟(jì)危害最大的病害之一,種植抗性品種是防治大豆胞囊線蟲病最經(jīng)濟(jì)有效的方法之一。本研究一方面對大豆胞囊線蟲胞囊計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行了優(yōu)化;另一方面,對大豆胞囊線蟲重要抗性位點(diǎn)Rhg1的功能進(jìn)行了探索。1、大豆胞囊線蟲抗性主要是通過統(tǒng)計(jì)根上的胞囊數(shù)來進(jìn)行評價(jià)的,因此,大豆胞囊線蟲計(jì)數(shù)是不可或缺的。常規(guī)方法計(jì)數(shù)費(fèi)時(shí)費(fèi)力,尋找高效準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)方法將大大促進(jìn)胞囊線蟲病的研究。前人利用氙氣或鹵素為激發(fā)光源的熒光成像系統(tǒng)進(jìn)行胞囊計(jì)數(shù),然而由于激發(fā)光能量偏低,只適用于新鮮胞囊,褐化胞囊不能清晰成像,計(jì)數(shù)效果欠佳。我們改用激光作為激發(fā)光源,并且摸索到合適的拍照條件以及計(jì)數(shù)參數(shù)。此種方法改進(jìn),褐化胞囊也能得到清晰且對比度高的圖片,可用于高效準(zhǔn)確進(jìn)行大批量樣品的胞囊計(jì)數(shù)。2、Rhg1是大豆胞囊線蟲重要抗性位點(diǎn)之一。前人研究中發(fā)現(xiàn),該位點(diǎn)上存在三個(gè)抗性相關(guān)基因。Glyma.18G022400（GmAAT）是其中之一,但其作用機(jī)制未知,本研究對其功能進(jìn)行了初步解析。序列分析表明GmAAT可能是氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體;通過組織特異性表達(dá)分析以及蛋白亞細(xì)胞定位,發(fā)現(xiàn)其可能通過維管系統(tǒng)運(yùn)輸氨基酸;氨基酸毒性劑量... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

大豆胞囊線蟲生活史Figure1-1lifecycleofheteroderaglycines（T.L.Niblacketal.,2006）

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言JAZ（Jasmonate ZIM-domain protein）轉(zhuǎn)錄因子，是植物體內(nèi) JA 信號(hào)的“開關(guān)”分子，能與轉(zhuǎn)錄因子或功能蛋白相結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié)功能。COI1 是 SCF-COI E2 連接酶的主要組成部分，JAZ 和 COI 蛋白結(jié)合后才能成為 JA-Ile 的受體，因此 JA-Ile 能夠使 JAZ 被泛素分子標(biāo)記，被蛋白酶體水解后釋放出轉(zhuǎn)錄因子，對下游基因進(jìn)行調(diào)控（張蒙,2016）。

（4）計(jì)數(shù)方法準(zhǔn)確性評估及效率檢測方法為了評估此方法的準(zhǔn)確性，我們隨機(jī)選擇了 15 份樣品，每份樣品分別采用體視鏡人工計(jì)數(shù)和軟件自動(dòng)計(jì)數(shù)兩種方法進(jìn)行計(jì)數(shù)，將這兩種方法的計(jì)數(shù)數(shù)目分別作為因變量和自變量，進(jìn)行一元回歸分析，R2值代表了這兩個(gè)變量之間相關(guān)性。為了比較機(jī)器計(jì)數(shù)和人工計(jì)數(shù)的效率，我們用這兩種方法分別對 5 組胞囊樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)，每組胞囊樣品分為三份進(jìn)行單獨(dú)計(jì)數(shù)，最后比較兩種方法所用時(shí)間平均數(shù)。2.2 結(jié)果與分析2.2.1 胞囊在不同條件下發(fā)射光強(qiáng)度的比較褐化胞囊與根顏色相似憑肉眼難以分辨（圖 2-1），需要尋找其他方式增強(qiáng)胞囊與根的對比度。在使用熒光成像技術(shù)時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)胞囊褐化后發(fā)射光強(qiáng)度減弱。如圖 2-2 所示，在 532nm 激發(fā)波長與 620nm 發(fā)射波長組合條件下，曝光時(shí)間為 10s 時(shí)(圖 2-2A、2B)，新鮮胞囊相對熒光強(qiáng)度為15215±1302，而褐化胞囊為 10959±3156。褐化胞囊相對光密度值為新鮮胞囊的 0.7，并且由于褐化程度不同，褐化胞囊個(gè)體之間熒光強(qiáng)度差異較大，這對成像和計(jì)數(shù)提出更高要求。當(dāng)使用 400w氙氣光源時(shí)，同樣拍照條件下褐化胞囊與根之間難以區(qū)分（圖 2-2C）。而使用激光光源褐化胞囊與根之間差異顯著，可以獲得清晰圖片（圖 2-2D），便于后期計(jì)數(shù)。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3390107