型幾丁質(zhì)酶（chitinaseⅢ, ChiⅢ）是植物重要的防衛(wèi)蛋白之一,可阻止病原菌的侵入和發(fā)展,抑制特定病害的發(fā)生,在植物抵抗病原菌的過程中具有重要作用。為了分離苜蓿ChiⅢ基因的基因組序列,進而分析其序列變異情況,本研究采用同源克隆法,從16個紫花苜蓿（Medicago sativa）品種的集群DNA中分離了9個屬于a類的ChiⅢ基因（ChiⅢa）的部分基因組編碼序列,分別與蒺藜苜蓿（Medicago truncatula）的9個ChiⅢa基因相對應(yīng),將其命名為chit3-1-1、chit3-1-2、chit3-1-4、chit3-1-5、chit3-1-6、chit3-1-9、chit3-1-10、chit3-1-11和chit3-1-12。序列變異分析顯示:chit3-1-1、chit3-1-2、chit3-1-5、chit3-1-9、chit3-1-10、chit3-1-11和chit3-1-12這7個基因的單核苷酸多態(tài)性（SNP）位點間的平均距離分別為28 bp、27 bp、648 bp、55 bp、64 bp、130 bp和131 bp,差異較大。表明chit3-1-5序... 

【文章來源】：分子植物育種. 2020,18(15)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

簡并引物對31F3/R52和32F1/32R4在苜蓿集群DNA中的擴增

由于苜蓿為自交不親和的同源四倍體植物，因此同一品種內(nèi)的不同單株在基因型上是異質(zhì)的(桂枝等,2015)。對本研究中的ChiⅢa基因來說，由16個苜蓿品種混合后所得到的集群DNA就相當于是將ChiⅢa基因的不同等位基因相互混合，而其中每個等位基因所占的比率就相當于該等位基因出現(xiàn)的頻率(桂枝等,2015)。因此，本研究中克隆測序的結(jié)果可用于分析其序列多態(tài)性。由于在9個新發(fā)現(xiàn)的苜蓿ChiⅢa基因中，chit3-1-1、chit3-1-2、chit3-1-5、chit3-1-9、chit3-1-10、chit3-1-11、chit3-1-12這7個基因有較多的轉(zhuǎn)化子已被測序，因此可以對它們進行序列多態(tài)性分析。分析結(jié)果顯示，chit3-1-1和chit3-1-2具有最多的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)候選位點和最小的SNP平均距離，chit3-1-9和chit3-1-10次之，chit3-1-11和chit3-1-12緊隨其后，而chit3-1-5具有最少的SNP候選位點和最大的SNP平均距離(表1)。其中，chit3-1-5的SNP位點間平均距離為648 bp，表明其序列非常保守，其在進化中受到了強烈的選擇壓力，可能在功能上極其重要。chit3-1-11和chit3-1-12也具有較大的SNP位點間平均距離分別為130 bp和131 bp，表明其在進化中也受到了強烈的選擇壓力，可能在功能上比較重要。而chit3-1-1和chit3-1-2的SNP位點間平均距離分別為38 bp和27 bp，表明其受到了較小的選擇壓力，在進化上比較年輕，其功能可能相對不重要。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]川西云杉幾丁質(zhì)酶基因PlCHI的克隆、表達與生物信息學分析[J]. 劉利娟,劉裕峰,楊帥,劉應(yīng)高.  植物科學學報. 2019(04)
[2]朝倉花椒幾丁質(zhì)酶類似基因的克隆及分析[J]. 劉雪薇,趙懿琛,趙德剛.  基因組學與應(yīng)用生物學. 2018(04)
[3]苜蓿多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白2（MsPGIP2）基因多態(tài)性分析[J]. 桂枝,皮永碩,袁慶華,曲澤鵬,高建明.  草地學報. 2016(05)
[4]紫花苜蓿PGIP同源基因克隆與序列核苷酸多態(tài)性分析[J]. 桂枝,肖婷,皮永碩,袁慶華,楊建翔,劉妍,高建明.  草業(yè)科學. 2015(10)
[5]甘蔗幾丁質(zhì)酶基因ScChiⅣ1的克隆、序列分析及其表達[J]. 許穎,王竹青,吳期濱,陳云,楊春春,馮敏謝,蘇亞春.  基因組學與應(yīng)用生物學. 2015(06)
[6]葉銹菌及信號分子誘導小麥TcLr35中β-1,3-葡聚糖酶基因的表達分析[J]. 栗小英,高琳,張艷俊,王海燕,劉大群.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2014(14)

碩士論文
[1]黃瓜—霜霉菌互作前期幾種基因的表達分析[D]. 毛雙雙.西北農(nóng)林科技大學 2014



本文編號：3389554