目的:明確膽囊癌與正常膽囊中ARAF基因的表達(dá)差異,探討該基因?qū)δ懩夷[瘤惡性表型的調(diào)控作用,為臨床治療該疾病提供新的理論依據(jù)。臨床資料與方法:連續(xù)收集紹興市人民醫(yī)院2018年2月至9月經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)的膽囊癌患者腫瘤組織及膽囊息肉患者息肉旁正常膽囊組織各12例。以RT-qPCR及Western blot檢測(cè)兩組組織中ARAF mRNA和編碼蛋白的表達(dá)水平。構(gòu)建ARAF siRNA組和siRNA control組膽囊癌細(xì)胞,以細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、增殖細(xì)胞核抗原蛋白（PCNA）檢測(cè)、集落形成實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ARAF對(duì)其增殖能力的調(diào)控作用;以劃痕實(shí)驗(yàn)、transwell實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ARAF對(duì)其遷移、侵襲能力的調(diào)控作用;以化療耐藥實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ARAF對(duì)其化療敏感性的影響。最后通過建立移植瘤動(dòng)物模型,研究在體條件下,ARAF異常表達(dá)對(duì)膽囊癌生長(zhǎng)的影響。對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)行Student’st-檢驗(yàn),比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,膽囊癌組織中ARAF mRNA表達(dá)水平與A-Raf蛋白含量顯著高于非腫瘤組織（P<0.05）。相較siRNA control組,ARAF siRNA可有效降低膽囊癌細(xì)胞的增殖能力、PCNA... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?基因在膽囊癌組織和細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)

２Ａ－Ｂ），即可證明ｄ／＾ＩＦｓｉＲＮＡ可有效沉默膽囊癌細(xì)胞中的基因，使其表達(dá)??下調(diào)，細(xì)胞模型構(gòu)建成功。??如圖２Ｃ－Ｄ所示，ＣＣＫ－８測(cè)定顯示Ｊ／ＭＦｓｉＲＮＡ組的細(xì)胞活力在４８小時(shí)后逐??漸弱于ｓｉＲＮＡｃｏｎｔｒｏ丨組，反應(yīng)其增殖速度相對(duì)減緩，這說明基因表迗下調(diào)??可導(dǎo)致膽囊癌細(xì)胞系增殖能力的減弱，且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示存在明顯差異。同時(shí)，??與ＵＦｓｉＲＮＡ組相比，ｓｉＲＮＡ?ｃｏｎｔｒｏｌ組的增殖細(xì)胞梭抗原蛋白（ＰＣＮＡ）表達(dá)量??相對(duì)更高（圖２Ｅ），同樣說明該組細(xì)胞的增殖狀態(tài)更加良好。??Ａ??＊?ＡＲＡＦｓｉＲＮＡ??？?ｆｔｉ－ｃｏｎｔｒｏｌ??Ｉ?１５１?？?？??ｓ?？?Ｂ??Ｉ１０?？“?？？?ＧＢＣ－ＳＤ?ＳＧＣ－９９６??ａ?一＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿??＜?ｏｓ?？．?ｓｉＲＮＡ?ｓｉ－ｃｏｎｔｒｏｌ?ｓｉＲＮＡ?ｓｉ－ｃｏｎｔｒｏｌ??ＳｊＡ－Ｒａｆ?參｜??￡?ＧＢＣ－ＳＤ?ＳＧＣ．Ｓ９６?６８ＫＤ??????ｒ?Ｐ－

圖３?表迗下調(diào)抑制膽囊癌細(xì)胞的集落形成能力

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Gallbladder cancer epidemiology, pathogenesis and molecular genetics: Recent update[J]. Aarti Sharma,Kiran Lata Sharma,Annapurna Gupta,Alka Yadav,Ashok Kumar.  World Journal of Gastroenterology. 2017(22)
[2]共干擾Hpa、EP-CAM對(duì)人膽囊癌細(xì)胞株裸鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 劉錚,劉會(huì)春,李三紅.  蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2012(04)
[3]KDR為靶的siRNA抑制乳腺癌細(xì)胞增殖的體內(nèi)外研究[J]. 張曉靜,葛銀林,侯琳,李泉.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2008(01)



本文編號(hào)：3388168