目的:肌萎縮側(cè)索硬化癥（ALS）和額顳葉癡呆（FTD）突變基因C9orf72相關(guān)二肽重復(fù)（DPR）蛋白poly-PR已經(jīng)被證實具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性,且DPR具有類似于瘋牛病蛋白（prion）的細(xì)胞間傳遞特征。但是對于其導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞退變的分子機(jī)制以及傳遞機(jī)制尚不清楚,因此我們設(shè)計相關(guān)實驗探究poly-PR導(dǎo)致神經(jīng)元死亡的分子機(jī)制。方法:使用合成的poly-PR（20個PR重復(fù),PR20）多肽以及慢病毒載體表達(dá)poly-PR（28個PR重復(fù),PR28）來處理SH-SY5Y細(xì)胞（神經(jīng)元細(xì)胞系）和小鼠原代皮層神經(jīng)元進(jìn)行實驗。使用細(xì)胞內(nèi)吞相關(guān)途徑的抑制劑探索poly-PR多肽進(jìn)入神經(jīng)元的內(nèi)吞機(jī)制。然后使用流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry）測定標(biāo)記了 FITC的poly-PR熒光強(qiáng)度,從而定量內(nèi)吞抑制劑使用后對poly-PR多肽進(jìn)入神經(jīng)元的抑制效果。其次使用RNA干擾（RNAi）技術(shù)來驗證poly-PR進(jìn)入神經(jīng)元的內(nèi)吞方式。通過乳酸脫氫酶（LDH）釋放實驗和Propidium iodide（PI）染色實驗檢測poly-PR對神經(jīng)元的毒性。使用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）檢測p... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＰＲ２ｑ多肽以網(wǎng)格蛋白依賴型細(xì)胞內(nèi)呑進(jìn)入細(xì)胞

圖２?ＰＲ２

圖３Ａ和３Ｂ）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Loss of VAPB Regulates Autophagy in a Beclin 1-Dependent Manner[J]. Dan Wu,Zongbing Hao,Haigang Ren,Guanghui Wang.  Neuroscience Bulletin. 2018(06)



本文編號：3381049