目的:肌萎縮側(cè)索硬化癥（ALS）和額顳葉癡呆（FTD）突變基因C9orf72相關二肽重復（DPR）蛋白poly-PR已經(jīng)被證實具有很強的神經(jīng)毒性,且DPR具有類似于瘋牛病蛋白（prion）的細胞間傳遞特征。但是對于其導致神經(jīng)細胞退變的分子機制以及傳遞機制尚不清楚,因此我們設計相關實驗探究poly-PR導致神經(jīng)元死亡的分子機制。方法:使用合成的poly-PR（20個PR重復,PR20）多肽以及慢病毒載體表達poly-PR（28個PR重復,PR28）來處理SH-SY5Y細胞（神經(jīng)元細胞系）和小鼠原代皮層神經(jīng)元進行實驗。使用細胞內(nèi)吞相關途徑的抑制劑探索poly-PR多肽進入神經(jīng)元的內(nèi)吞機制。然后使用流式細胞術（Flow cytometry）測定標記了 FITC的poly-PR熒光強度,從而定量內(nèi)吞抑制劑使用后對poly-PR多肽進入神經(jīng)元的抑制效果。其次使用RNA干擾（RNAi）技術來驗證poly-PR進入神經(jīng)元的內(nèi)吞方式。通過乳酸脫氫酶（LDH）釋放實驗和Propidium iodide（PI）染色實驗檢測poly-PR對神經(jīng)元的毒性。使用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）檢測p... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＰＲ２ｑ多肽以網(wǎng)格蛋白依賴型細胞內(nèi)呑進入細胞

圖２?ＰＲ２

圖３Ａ和３Ｂ）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Loss of VAPB Regulates Autophagy in a Beclin 1-Dependent Manner[J]. Dan Wu,Zongbing Hao,Haigang Ren,Guanghui Wang.  Neuroscience Bulletin. 2018(06)



本文編號：3381049