植物干細(xì)胞是植物胚后發(fā)育形成各種組織器官的細(xì)胞來源和信號(hào)調(diào)控中心。擬南芥根尖干細(xì)胞受PLTs和WOX5等轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控。PLT2蛋白在QC和干細(xì)胞中大量積累,過量表達(dá)PLT2基因使根分生組織變長;WOX5基因在靜止中心細(xì)胞特異性表達(dá),在維持周圍的干細(xì)胞的特性中起重要作用,WOX5過量表達(dá)可抑制柱干細(xì)胞的分化。為進(jìn)一步了解植物根尖干細(xì)胞調(diào)控的分子機(jī)理,本研究主要通過酵母雙雜交篩選PLT2相互作用蛋白以及對plt1plt2突變體進(jìn)行EMS誘變,篩選短根恢復(fù)突變體,并進(jìn)一步探究了WOX5基因過量表達(dá)對擬南芥生長發(fā)育的影響。主要研究結(jié)果如下:1、構(gòu)建pGBKT7-PLT2誘餌表達(dá)載體,利用營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基篩選cDNA文庫,共篩選出6個(gè)與PLT2相互作用的蛋白,采用酵母雙雜交和BIFC技術(shù)驗(yàn)證了其中兩個(gè)蛋白（HSP20和DJA6）與PLT2之間的相互作用,表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)HSP20和DJA6在根尖和莖尖分生組織中表達(dá),暗示HSP20和DJA6有可能參與根尖和莖尖干細(xì)胞調(diào)控。2、從EMS誘變的plt1plt2突變體庫中篩選到了能部分恢復(fù)plt1plt2根生長缺陷的突變體,初步表型分析發(fā)現(xiàn)它們的根尖分生... 

【文章來源】：重慶師范大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

擬南芥根尖結(jié)構(gòu)圖(引自Leeetal.,2013)

母雙雜交技術(shù)利用酵母轉(zhuǎn)錄激活作用原理，轉(zhuǎn)錄活化蛋白能夠與特而啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)[71]。目前酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)普遍采用 G這種 DNA 結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由兩個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域分別來完活因子 GAl4 由 DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain，BD)和 DNA 轉(zhuǎn)(Activation Domain，AD)組成，BD 能夠識(shí)別 DNA 上的特異序列位在調(diào)控基因上游，從而激活調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄[72]。在利用 GAL4 系文庫或研究蛋白與蛋白間互作時(shí)，靶蛋白(“誘餌”)與 DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域與文庫蛋白或要驗(yàn)證的蛋白相結(jié)合[73]。一般情D 能夠與 GAL4 上游 UAS 序列結(jié)合但是不能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，單獨(dú)的 其功能，所以，只有兩者在物理空間上相互靠近時(shí)才再現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因UAS 結(jié)合并激活報(bào)道基因的轉(zhuǎn)錄。AH109 酵母菌中，通過基因工L4/UAS 系統(tǒng)的啟動(dòng)子下游構(gòu)建了 ADE2(Adenine 2)，HIS3(Histi或 LacZ)報(bào)道基因，所以，在實(shí)驗(yàn)操作過程中可以通過營養(yǎng)缺陷的選或驗(yàn)證兩個(gè)蛋白之間是否存在相互作用。

重慶師范大學(xué)碩士學(xué)位論文 2 材料與方法2 材料與方法2.1 材料2.1.1 植物材料擬南芥 Columbia(Col-0)、plt1plt2 和 MiR160，這些材料均由本實(shí)驗(yàn)保存。2.1.2 菌株和質(zhì)粒菌株：DH5α (Escherichia coli) 菌株購自 TaKaRa 公司；根癌農(nóng)桿菌LBA4404(Agrobacteriumtumefaciens)菌株購天根生化科技(北京)有限公司；AH109酵母菌株由本實(shí)驗(yàn)室保存。質(zhì)粒：pMD19-T 載體購自 TaKaRa 公司；載體 pFPL-GUS-GFP 由本實(shí)驗(yàn)室改造；酵母質(zhì)粒 pGBKT7、pGADT7(圖 2.1)、pGBKT7-53、pGBKT7-Lam 和pGADT7-T 由本實(shí)驗(yàn)室保存；1300-SPYCE 和 1300-SPYNE 由本實(shí)驗(yàn)室保存。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]生長素與植物根尖干細(xì)胞巢的維持[J]. 張倩倩,鄭童,予茜,葛磊.  植物學(xué)報(bào). 2018(01)
[2]ARF2 coordinates with PLETHORAs and PINs to orchestrate ABA-mediated root meristem activity in Arabidopsis[J]. Sujittra Promchuea,Yujuan Zhu,Zhizhong Chen,Jing Zhang,Zhizhong Gong.  Journal of Integrative Plant Biology. 2017(01)
[3]植物干細(xì)胞研究進(jìn)展[J]. 田奇琳,賴鐘雄.  園藝與種苗. 2013(08)
[4]植物根尖干細(xì)胞微環(huán)境的遺傳調(diào)控[J]. 徐龐連,陽成偉,李春鑫,袁東柯.  華南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(02)
[5]植物根尖分生組織干細(xì)胞調(diào)控模式[J]. 陳金慧,王鵬凱,張艷娟,施季森.  南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(04)
[6]植物干細(xì)胞研究進(jìn)展[J]. 王德信.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(20)
[7]擬南芥抗鹽突變體篩選中鹽濃度的確定[J]. 趙佳,蔣春云,沈曉艷.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2010(23)
[8]大規(guī)模酵母雙雜交技術(shù)研究蛋白質(zhì)相互作用的應(yīng)用[J]. 吳志豪,王建,賀福初.  遺傳. 2006(12)
[9]酵母雙雜交技術(shù)的發(fā)展[J]. 朱靜儀.  中山大學(xué)研究生學(xué)刊(自然科學(xué)、醫(yī)學(xué)版). 2002(02)

博士論文
[1]兩組類受體激酶調(diào)控?cái)M南芥根生長發(fā)育的分子機(jī)理[D]. 歐洋.蘭州大學(xué) 2017
[2]ABO8參與ABA介導(dǎo)的線粒體活性氧信號(hào)調(diào)控?cái)M南芥根生長[D]. 楊麗.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]細(xì)胞分裂素和生長素調(diào)控?cái)M南芥體細(xì)胞胚根端分生組織建立的分子基礎(chǔ)[D]. 劉玉博.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[4]擬南芥體細(xì)胞胚胎發(fā)生的機(jī)理研究[D]. 蘇英華.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008

碩士論文
[1]利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選家蠶BR-C轉(zhuǎn)錄因子的相互作用蛋白[D]. 王永虎.西南大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3379166