為探究高粱抗病基因SbSGT1的功能,以高粱BTx623為材料,利用RNA反轉(zhuǎn)錄得cDNA,以cDNA為模板擴增出全長SbSGT1基因,并對其進行生物信息學分析。進一步構(gòu)建pET-28a-SbSGT1重組質(zhì)粒進行原核表達,并分別對表達菌株、誘導(dǎo)溫度以及異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)濃度進行了優(yōu)化。結(jié)果表明,SbSGT1全長1 095 bp,編碼364個氨基酸,蛋白理論分子大小約為40.45 kDa,蛋白質(zhì)等電點為5.0。進化樹分析表明,SbSGT1與玉米和水稻的親緣性較高;蛋白質(zhì)序列分析表明,SbSGT1蛋白為親水性蛋白,定位在細胞質(zhì)中;二級結(jié)構(gòu)預(yù)測發(fā)現(xiàn)其α螺旋和無規(guī)則卷曲占比最高,分別達到43.41%和45.88%。原核表達結(jié)果表明,SbSGT1最佳表達菌株為大腸桿菌BL21（DE3）,最佳誘導(dǎo)溫度和IPTG濃度分別為25℃和0.8 mmol·L^-1。本研究為進一步探究SbSGT1基因在高粱抗病機理中所發(fā)揮的生物學功能奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：核農(nóng)學報. 2020,34(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

SbSGT1蛋白跨膜區(qū)預(yù)測

以高粱BTx623幼苗總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板,以高粱基因組數(shù)據(jù)庫(https://phytozome)的SbSGT1基因序列為參考,用Primer Premier 5.0設(shè)計的SbSGT1-F/SbSGT1-R引物對進行PCR擴增,擴增得到序列為1 095 bp的目的基因,共編碼 364個氨基酸。采用1%瓊脂糖凝膠電泳對獲得的PCR產(chǎn)物進行檢測,得到的條帶大小與數(shù)據(jù)庫中的一致(圖1)。2.2 生物信息學分析

在NCBI比對下載SGT1在其他物種的同源序列,與高粱SbSGT1進行序列同源性分析。由圖2可知,SbSGT1與玉米(Zea mays)同源性為94.87%,與水稻(Oryza sativa)的同源性為85.75%,與大麥(Hordeum vulgare)的同源性為83.24%,與小麥(Triticum aestivum)的同源性為81.82%,說明SGT1在這幾種植物中都相對保守。2.2.2 SbSGT1基因系統(tǒng)進化樹分析


本文編號：3365147