近年來,由于生產(chǎn)水平的提高和農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的優(yōu)化,以及人們膳食結(jié)構(gòu)的調(diào)整,甘薯（Ipomoea batatas L.）作為重要的糧食、飼料、工業(yè)原料及新能源,種植的面積日益加大,人們對(duì)甘薯的需求也日益增高。甘薯是一種無性繁殖作物,極易在代代繁殖中累積病毒,從而導(dǎo)致產(chǎn)量大減,品質(zhì)變差。深入研究甘薯抗病機(jī)制,可以為甘薯的優(yōu)質(zhì)育種提供依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)室前期通過轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析,篩選出一些與甘薯抗病毒病相關(guān)的基因,其中包括SPW5基因。本研究從甘薯品種徐薯22中克隆出了SPW5基因,并對(duì)其核苷酸序列進(jìn)行了分析,證明SPW5屬于WRKY轉(zhuǎn)錄因子,成功構(gòu)建了該基因過表達(dá)載體SPW5-p101-GV3101。對(duì)甘薯的再生體系進(jìn)行了探索:以無菌試管苗為材料,分別將4個(gè)甘薯品種的莖尖、葉片、葉柄、側(cè)芽作為外植體建立再生體系,并對(duì)離體再生培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化,成功誘導(dǎo)出愈傷組織,并進(jìn)行懸浮培養(yǎng),成功誘導(dǎo)出體細(xì)胞胚。并且對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的SPW5基因表達(dá)載體遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了探索。主要研究結(jié)果如下:1.基因克隆及載體構(gòu)建:根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序得到的序列設(shè)計(jì)SPW5基因引物,從甘薯品種徐薯22中克隆了SPW5基因CDS序列。然后利... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

WRKY轉(zhuǎn)錄因子參與植物逆境脅迫應(yīng)答作用模式圖

第 2 章 甘薯 SPW5 基因克隆及生物信息學(xué)分析設(shè)計(jì)，正向引物和反向引物分別是 F：5’-cgcagcagcccagccaagaaagatatatga-3’，R3’-atggagaacaaatttgatgacctcatcat-5’，預(yù)計(jì)克隆的基因片段為 1182bp，PCR 擴(kuò)增產(chǎn)進(jìn)行 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)(圖 2-1a)，擴(kuò)增后產(chǎn)物連接 TOPO-pENTR 載體，轉(zhuǎn)大腸桿菌感受態(tài) DH5 ，涂 LB+Kan 抗性平板，37°C 培養(yǎng) 13-16h 出現(xiàn)單菌落，擇 12 個(gè)單菌落在 LB+Kan 液體培養(yǎng)基中搖菌，200r/min 過夜培養(yǎng)，然后采用擴(kuò)引物進(jìn)行 PCR 檢測(cè)(圖 2-1b)并送測(cè)序。電泳檢測(cè)與目的片段大小相同，測(cè)序結(jié)序列與目的序列對(duì)比相同，則表明成功克隆了該基因。

18圖 2-2 SPW5 氨基酸序列Figure 2-2 Amino acid sequence of SPW5紅色方框表示 WRKY 基序2.4.2.2 氨基酸的預(yù)測(cè)分析(1)氨基酸理化性質(zhì)的分析：將甘薯 SPW5 的氨基酸序列輸入 Expasy 網(wǎng)站中進(jìn)行預(yù)測(cè)其理化性質(zhì)，結(jié)果表明 SPW5 基因編碼的蛋白質(zhì)分子量為 43301.21Da；分子式為 C1896H2963N527O613S11，原子總數(shù)為 6010；等電點(diǎn) pI 為 6.36，共編碼 393 個(gè)氨基酸；其中帶負(fù)電荷的殘基總數(shù)(Asp + Glu)為 41；帶正電荷的殘基總數(shù)(Arg + Lys)

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3360895