發(fā)布時(shí)間：2021-08-21 03:54

　　為探究暗紋東方鲀dmrt1基因的序列和結(jié)構(gòu)信息,初步研究dmrt1基因在性腺發(fā)育和性別分化過(guò)程中的作用,我們利用RACE技術(shù)成功分離出暗紋東方鲀dmrt1基因cDNA的全長(zhǎng)序列,并對(duì)其在成魚(yú)不同組織和幼魚(yú)不同發(fā)育期性腺組織中的表達(dá)進(jìn)行了鑒定和分析。結(jié)果表明:dmrt1基因cDNA全長(zhǎng)1620bp（NCBI登錄號(hào):MH218816）,編碼294個(gè)氨基酸,與紅鰭東方鲀及星點(diǎn)東方鲀序列相似性最高。dmrt1基因編碼的蛋白是一種不穩(wěn)定的親水性蛋白,不存在信號(hào)肽序列和跨膜區(qū);該蛋白最可能存在于線粒體、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核;Dmrt1蛋白含有45個(gè)磷酸化位點(diǎn),但不含N(糖基化位點(diǎn)和跨膜保守結(jié)構(gòu)域,二級(jí)結(jié)構(gòu)以無(wú)規(guī)卷曲為主;氨基酸多重序列比對(duì)結(jié)果顯示Dmrt1氨基酸序列的DM結(jié)構(gòu)域在哺乳動(dòng)物和魚(yú)類(lèi)中均高度保守,且近C—末端的氨基酸序列也比較保守。熒光定量PCR分析顯示dmrt1基因主要在雄魚(yú)中表達(dá),尤其是在精巢中表達(dá)量最高,而且dmrt1在幼魚(yú)不同發(fā)育期精巢中的表達(dá)量呈現(xiàn)出先降低再迅速升高的表達(dá)趨勢(shì),而相對(duì)于精巢而言,卵巢中dmrt僅有微弱表達(dá)。研究結(jié)果表明,dmrt1可能在雄性性別分化和精巢發(fā)育等過(guò)程中發(fā)... 

【文章來(lái)源】：海洋湖沼通報(bào). 2020,(06)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：12 頁(yè)

【部分圖文】：

暗紋東方鲀dmrt1基因部分CDS(a)、5’-RACE (b)和3’-RACE (c)電泳圖

通過(guò)PCR反應(yīng)擴(kuò)增得到491bp長(zhǎng)度的片段(圖1-a),根據(jù)獲得的序列設(shè)計(jì)特異性引物,用RACE擴(kuò)增出cDNA 的5’和3’序列,其中5’-RACE序列長(zhǎng)度為684bp(圖1-b),3’-RACE序列長(zhǎng)度為967bp(圖1-c),由于連接轉(zhuǎn)化后的菌液進(jìn)行PCR鑒定引物是通用引物M13F/M13R,因此PCR擴(kuò)增產(chǎn)物條帶長(zhǎng)度要大于目的條帶長(zhǎng)度。將5’-RACE和3’-RACE序列拼接后得到暗紋東方鲀dmrt1基因1620bp的cDNA全長(zhǎng)序列,包括5’非編碼區(qū)23bp和3’非編碼區(qū)712bp,開(kāi)放閱讀框885bp,編碼294個(gè)氨基酸,其中28～75aa為DM結(jié)構(gòu)域,第28、31、47、52、54和57位的Cys位點(diǎn)以及第34和43位的His位點(diǎn)構(gòu)成C2H2C4型鋅指結(jié)構(gòu),可使DNA發(fā)生二聚化并形成與其結(jié)合的回文結(jié)構(gòu)(圖2)。其蛋白相對(duì)分子量為31.69Ku,等電點(diǎn)為8.32,蛋白分子式為C1342H2109N397O445S24,總原子數(shù)為4317。成熟蛋白質(zhì)中含有帶負(fù)電荷的酸性氨基酸(Asp+Glu)和帶正電荷的堿性氨基酸(Arg+Lys)分別為22和26個(gè)。摩爾消光系數(shù)為22765,不穩(wěn)定系數(shù)為61.72,屬于不穩(wěn)定蛋白�？偲骄杷笖�(shù)GRAVY(Grand average of hydropathicity)為-0.556,屬于親水性蛋白(圖3)。圖3 暗紋東方鲀Dmrt1蛋白的疏水性分析圖

暗紋東方鲀Dmrt1蛋白的疏水性分析圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3354823