隨著水稻基因組測(cè)序的完成,闡明水稻重要基因功能的研究也日漸迫切。利用ZFN、TALEN基因編輯技術(shù)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了單個(gè)基因的定向敲除,但是對(duì)于家族基因的功能分析、基因之間的相互作用、多基因調(diào)控同一個(gè)復(fù)雜農(nóng)藝性狀的闡明則需要多基因突變體進(jìn)行研究。雖然可以利用傳統(tǒng)的雜交方法獲得多基因突變體,但是品種間基因滲透和連鎖使得之后的篩選工作量加大。近年來發(fā)展起來的CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)能定向的突變基因,避免了傳統(tǒng)多突變體獲得過程中的基因連鎖和基因滲透現(xiàn)象。因此,利用CRISPR/Cas9多基因編輯技術(shù)獲得多個(gè)基因共敲除突變體不僅對(duì)水稻基因功能研究有重大意義而且在水稻育種中有很大的應(yīng)用價(jià)值。本研究在已有的CRISPR/Cas9系統(tǒng)上建立了水稻中CRISPR/Cas9多基因敲除系統(tǒng),并對(duì)該多基因敲除系統(tǒng)進(jìn)行優(yōu)化,利用優(yōu)化過的多基因編輯系統(tǒng)進(jìn)行水稻中多基因編輯實(shí)驗(yàn)。主要研究結(jié)果如下:一、CRISPR/Cas9介導(dǎo)的水稻單基因敲除在前人CRISPR/Cas9系統(tǒng)的基礎(chǔ)上,以單敲除水稻OsMKK4基因?yàn)槔?通過CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建雙元表達(dá)載體pC1300-Cas9-gMKK4,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：129 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１?ＤＳＢ修復(fù)基因示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ＤＳＢ?ｒｅｐａｉｒ．??

雙鏈斷裂區(qū)（Ｄｏｕｂｌｅ－ＳｔｒａｎｄｅｄＢｒｅａｋｓ，ＤＳＢ）；通過破壞非同源末端鏈接（ｎｏｎ－ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ?ｅｎｄ??ｊｏｉｎｉｎｇ，ＮＨＥＪ）使目的基因失活，或借助同源重組（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，?ＨＲ）等方式完??成ＤＮＡ的修復(fù)連接，可以使斷裂的ＤＮＡ雙鏈重新黏合（圖１．２）。??ａ?ＺＦＮ??ｃｕｔ?ｓｉｔｅ??Ｙ????，?一?，??：?：??產(chǎn)?，??１?２?３?：?４?！?Ａ?Ｇｅｎｅ?Ａ??Ｉ?ｐＡ??備?＿ＥＪ??——］—：?Ｔ＿?２?．Ｅ：：３?——Ｌｉ?—?ＧｅｎｅＡＫＯ??ｂ?Ｓ＇ａｒｍ?■?，?．?，?ｐＡ?３＊?ａｒｍ??３．＿，???＇１?；?＇?２?：?—３???４???ＧｅｎｅＡ？＾??＾?ＨＲ??ｍｍｍ?「二＇?…；ｒ?ｖ?．?？…＇：??：」—?ｌ．Ａ?—ｆＴ！…；…４…ｉ?４?．?￣￣￣?ＧｅｎｅＡ＾??Ｃ?Ｓ＇?ａｒｍ?｜?Ｘ＾ｌＵＬ????—２?Ｊ?．?：?１．，?—???Ｇｅｎｅ??ｐＡ??ｌ?ＨＲ???；１?；?：?２?－?３??；?４???ＧｅｎｅＡ＾??圖１．２通過ＺＦＮ技術(shù)對(duì)基因進(jìn)行編輯操作的幾種主要方式示意圖［３

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3332345