目的:應(yīng)用多重PCR與毛細(xì)管DNA電泳法檢測骨髓增殖性腫瘤（MPN）主要致病基因中的JAK2V617F及CALR第九外顯子突變,并對該方法的檢測性能進(jìn)行評價(jià)。方法:同時(shí)設(shè)計(jì)特異性的JAK2617F等位基因突變PCR引物以及CALR基因第九外顯子擴(kuò)增引物,對引物進(jìn)行Cy5熒光標(biāo)記,所有引物在同一PCR反應(yīng)管中進(jìn)行擴(kuò)增,并將PCR產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析,同時(shí)驗(yàn)證該方法的檢測限、靈敏度,并與商品化試劑盒進(jìn)行對比。結(jié)果:多重PCR與毛細(xì)管電泳技術(shù)結(jié)合可在一個(gè)PCR反應(yīng)中同時(shí)檢測JAK2V617F與CALR基因突變,可以在0.01 ng的基因組DNA中檢測出JAK2V617F突變,可在0.1 ng的基因組DNA檢測出JAK2V617F與CALR雙陽性突變,至少可檢測出0.1%的JAK2V617F陽性突變,該方法與商品化診斷試劑盒進(jìn)行對比結(jié)果相一致。結(jié)論:基于多重PCR與毛細(xì)管電泳技術(shù),可在外周血中同時(shí)檢測JAK2V617F與CLAR基因第九外顯子突變,該方法為MPN的診斷提供了新的分子檢測手段。 

【文章來源】：中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2020,28(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    試劑與儀器
    全血DNA的提取及濃度檢測
    突變位點(diǎn)引物設(shè)計(jì)
    多重PCR反應(yīng)
    毛細(xì)管電泳分析
    JAK2V617F檢出限
    JAK2V617F與CLAR雙陽性突變檢出限
    JAK2V617F突變負(fù)荷檢出限
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證與數(shù)字統(tǒng)計(jì)
結(jié)果
    多重PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的毛細(xì)管電泳技術(shù)分離
    JAK2V617F檢出限檢測
    JAK2V617F與CLAR雙陽性突變檢出限
    JAK2V617F突變負(fù)荷檢出限
    結(jié)果驗(yàn)證
討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]BCR-ABL陰性骨髓增殖性腫瘤208例臨床分析[J]. 沈慶慧,郭玉潔,薛春娥,王艷,林鳳茹.  中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2019(01)
[2]JAK2V617F突變負(fù)荷量對ET患者臨床表現(xiàn)和生存影響的研究[J]. 趙世香,陸智祥,虞利群,關(guān)心,何海萍,史克倩,趙仁彬,楊同華.  中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2018(05)
[3]骨髓增殖性疾病相關(guān)基因最新研究進(jìn)展[J]. 肖裕鴻,王一浩,邵宗鴻.  中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2017(04)



本文編號：3331702