目的探究血管內(nèi)皮生長因子165（VEGF165）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP2）雙基因轉(zhuǎn)染SD大鼠骨髓基質(zhì)干細胞（BMSCs）及其基因表達與體外成骨能力。方法提取SD大鼠脛骨骨髓,原代培養(yǎng)獲得BMSCs并進行流式細胞學(xué)鑒定。通過脂質(zhì)體（Lipofect-amine2000）介導(dǎo)VEGF165、BMP2基因轉(zhuǎn)染SD大鼠BMSCs,并分為pIRES-hBMP2-hVEGF165轉(zhuǎn)染組（雙基因轉(zhuǎn)染）、pIRES-hBMP2轉(zhuǎn)染組（單基因轉(zhuǎn)染）、pIREShVEGF165轉(zhuǎn)染組（單基因轉(zhuǎn)染）、空載轉(zhuǎn)染組（空白對照）。采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法（MTT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗、組織學(xué)染色方法評估基因轉(zhuǎn)染BMSCs的增殖情況、基因表達及體外成骨能力。結(jié)果流式細胞鑒定培養(yǎng)的BMSCs表面Marker示CD44和CD90標(biāo)志物陽性,CD34和CD45標(biāo)志物為陰性,證實成功獲取大鼠BMSCs。通過熒光顯微鏡觀察各轉(zhuǎn)染組BMSCs,24h后可見綠色熒光發(fā)出,表明轉(zhuǎn)染成功。MTT結(jié)果顯示:隨著時間的延長,各轉(zhuǎn)染組BMSCs細胞的數(shù)量呈上升趨勢,與未轉(zhuǎn)染BMSCs的相比,細胞數(shù)量峰值無明顯差異,證實轉(zhuǎn)染后BM... 

【文章來源】：重慶醫(yī)學(xué). 2020,49(20)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

pIRES-hBMP2-hVEGF165轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后不同時間BMSCs免疫熒光

除空載轉(zhuǎn)染組外，通過熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后BMSCs，轉(zhuǎn)染24h后，pIRES-hBMP2-hVEGF165轉(zhuǎn)染組可見少量綠色熒光，證實轉(zhuǎn)染成功；轉(zhuǎn)染3d后，鏡下熒光強度明顯增強，轉(zhuǎn)染率明顯提高，見圖1。圖3 各轉(zhuǎn)染組細胞BMP2蛋白水平

各轉(zhuǎn)染組細胞BMP2蛋白水平

【參考文獻】：
期刊論文
[1]骨形態(tài)發(fā)生蛋白2和血管內(nèi)皮生長因子165雙基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞的異位誘導(dǎo)成骨能力[J]. 周航宇,夏德林,甘生遠,邵學(xué)磊.  中國組織工程研究. 2017(09)
[2]內(nèi)皮祖細胞促進組織工程骨體內(nèi)成骨[J]. 吳莉,趙嫻,何波,陳澤谷,陸林,魏韓笑,張承磊,劉流.  中國修復(fù)重建外科雜志. 2016(01)
[3]hBMP2/hVEGF165雙基因腺病毒修飾BMSCs復(fù)合n-HA/PA66修復(fù)骨缺損影像學(xué)觀察[J]. 管大凡,陳月芹,劉洪美,張聰,李慶偉,陳國武,梁嘯,孟純陽.  中國矯形外科雜志. 2015(20)
[4]不同力學(xué)刺激對骨性關(guān)節(jié)炎軟骨Ⅰ型膠原蛋白產(chǎn)生的影響[J]. 張猛,張杰,張文,顧曉暉,周龍,羅宗平.  中國矯形外科雜志. 2015(13)
[5]淫羊藿苷對大鼠成骨細胞增殖及堿性磷酸酶、Runx2蛋白表達的影響[J]. 李玲慧,丁道芳,杜國慶,宋奕,石印玉,詹紅生.  中國矯形外科雜志. 2013(21)
[6]外源性生長因子修飾脂肪組織來源干細胞成骨與成軟骨表達的研究進展[J]. 劉兆杰,胡永成.  中國矯形外科雜志. 2013(03)
[7]外源性VEGF復(fù)合煅燒骨修復(fù)骨缺損[J]. 周東生,王永會,董宏朋,王魯博,王伯珉.  山東醫(yī)藥. 2005(27)



本文編號：3330479