【背景和目的】近來,能突破va基因型抗性的馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）毒株在煙草上不斷出現(xiàn)。2016年,我們分離到一株抗性突破的毒株P(guān)VY-CJ,本文對該病毒分離物進行了驗證和鑒定。【方法】采用病毒重新接種、多重RT-PCR、RT-PCR分段擴增病毒全長基因組、PVY病毒分子進化分析及病毒蛋白VPg蛋白序列比對等方法對PVY-CJ毒株進行了驗證和鑒定�！窘Y(jié)果】三種重新接種了PVY-CJ的va基因型煙草品種均發(fā)病。多重RT-PCR結(jié)果將PVY-CJ鑒定為PVY^NTN株系。序列分析表明,PVY-CJ全長基因組包含一個全長9180 nt的開放讀框,其編碼一個3060 AA的多聚蛋白。分子進化分析進一步驗證了其歸類于PVY^NTN株系。相比其他PVY^NTN株系毒株,PVY-CJ的VPg蛋白105位氨基酸出現(xiàn)了一個由賴氨酸到谷氨酸的替換,而這一氨基酸替換導致了其對va基因來源抗性的突破�！窘Y(jié)論】我們首次報道并鑒定了國內(nèi)一株能突破va基因型煙草抗性的PVY毒株—PVY-CJ。這為進一步研制PVY抗病煙草品種提供... 

【文章來源】：中國煙草學報. 2020,26(04)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

PVY-CJ重新接種va基因型煙草

多重RT-PCR鑒定PVY-CJ株系

如圖3所示，采用張帥等的分段RT-PCR方法[8]擴增PVY-CJ的全長基因組，所獲得的條帶大小均在3 kb～5 kb之間。對3段擴增產(chǎn)物進行測序，分別測通，因為3段產(chǎn)物的序列有重疊區(qū)域，故拼裝3段序列最終得到長9614 nt的全長基因組（5′和3′非翻譯區(qū)域不完整）。分析獲得的基因組序列，發(fā)現(xiàn)PVY-CJ包含一個全長9180 nt的開放讀框，開放讀框編碼一個長3060 AA的多聚蛋白。將該序列提交到Gen Bank，序列登錄號為KY800342。如圖4所示,參照Xiaojun Hu等PVY株系分子進化分析方法[10],對PVY-CJ進行分子進化分析。包括PVY-CJ在內(nèi)的53個PVY毒株至少形成了7個簇,圖示PVY-CJ歸于PVYNTN株系,與前述多重RT-PCR結(jié)果一致。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]利用CRISPR-Cas9基因組編輯技術(shù)定向敲除煙草eIF4E-6基因[J]. 潘洪杏,劉俠,萬秀清,喬嬋,宋琳娜,郭兆奎,李若.  分子植物育種. 2017(02)
[2]貴州煙草上一株P(guān)VY壞死株系全序列測定與分析[J]. 張帥,楊金廣,王鳳龍,錢玉梅,申莉莉,王永.  中國煙草科學. 2011(01)



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