玉米基因功能研究是玉米品種改良的重要基礎(chǔ),系統(tǒng)地分析單個基因的功能或基因之間的功能互作,是未來幾年研究的重點(diǎn)。植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)不僅被用于研究基因的功能,還被用于提升作物品質(zhì)和抗性。玉米的遺傳轉(zhuǎn)化需要建立快速高效的玉米遺傳轉(zhuǎn)化體系,而目前玉米轉(zhuǎn)化體系主要建立在18-599R、C01、B104、A188和HiII等少數(shù)能高效誘導(dǎo)胚性愈傷組織的優(yōu)良轉(zhuǎn)基因受體材料的基礎(chǔ)上,我國的大多數(shù)骨干自交系由于胚性愈傷組織誘導(dǎo)率能力差仍不能直接作為轉(zhuǎn)化的受體,這在很大程度上限制了我國轉(zhuǎn)基因育種和功能基因研究的快速發(fā)展。因此研究玉米幼胚誘導(dǎo)胚性愈傷組織的功能基因、揭示其作用的分子機(jī)制具有重要意義。課題組前期利用全基因組關(guān)聯(lián)分析和QTL定位共同檢測到一個可能參與植物激素信號傳導(dǎo)來調(diào)控玉米愈傷組織的形成的基因GRMZM2G038183,本研究進(jìn)一步通過候選基因關(guān)聯(lián)分析、擬南芥T-DNA插入突變體和玉米EMS突變體,擬南芥過表達(dá)等方式初步驗(yàn)證候選基因GRMZM2G038183在擬南芥和玉米幼胚胚性愈傷組織誘導(dǎo)過程中行使的生物學(xué)功能,旨在解析GRMZM2G038183基因和玉米幼胚胚性愈傷組織誘導(dǎo)能力的關(guān)系。主要研... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

GRMZM2G038183在植物中的的進(jìn)化關(guān)系

本研究的技術(shù)路線

17圖4總DNA瓊脂糖凝膠電泳Fig.4TotalDNAagarosegelelectrophoresis（4）GRMZM2G038183的克隆與測序本研究通過PCR法在198份玉米自交系材料中克隆GRMZM2G038183。為了最大限度的減少人為誤差，避免PCR導(dǎo)致的序列錯誤，擴(kuò)增序列用高保真酶KOD進(jìn)行擴(kuò)增，每個樣品重復(fù)三次，KOD酶的PCR擴(kuò)增體系如下：PCR擴(kuò)增體系為20μl：0.5μlKODFX，10μlKODbuffer，4μldNTPs，0.5μl上游引物F，0.5μl下游引物R，0.5μlDNA模板，4μlddH2O。PCR反應(yīng)程序如下：預(yù)變性94℃2min變性98℃10s退火59℃30s35個循環(huán)延伸68℃3min20s再延伸68℃10min保存12℃Forever反應(yīng)結(jié)束后，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖電泳檢測，選取條帶較亮且單一的片段進(jìn)行切膠回收，回收純化PCR片段直接送公司測序，為保證一致，對PCR片段進(jìn)行雙向測序，對于測序差異較大的，重新進(jìn)行PCR擴(kuò)增測序。利用SnapGene軟件將反饋的測序結(jié)果與目標(biāo)基因進(jìn)行序列相似性比對，鑒定是否成功擴(kuò)增目標(biāo)基因。2.2.2GRMZM2G038183的序列多樣性分析把測序成功的序列整理成FASTA格式，在BioEdit中將整理好的198條序列打開，使用AccessoryApplication中的clustalwMμltipealignment進(jìn)行多序列比對，并將完成比對的序列保存為PHYLIP格式文件。用TASSEL5.2軟件對GRMZM2G038183進(jìn)行序列多樣性分析，多樣性分析采用SlidingWindow分析方法，Window設(shè)為300bp，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]玉米轉(zhuǎn)基因受體材料的篩選研究[J]. 尚麗霞,于志晶,蔡勤安,孟凡鋼,曾軍,林秀峰,馬瑞.  吉林農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(06)
[2]玉米幼胚和成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)過程中內(nèi)源激素的比較[J]. 賈小霞,王漢寧,孔維萍,梁慧光,張金文.  核農(nóng)學(xué)報. 2009(04)
[3]玉米成熟胚胚性愈傷組織的誘導(dǎo)、高頻再生及轉(zhuǎn)化的研究[J]. 王世玉,鄭用璉,劉亞,趙久然,張方東.  作物學(xué)報. 2008(03)
[4]玉米自交系幼胚高效再生系統(tǒng)的建立[J]. 馬麗.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2007(06)
[5]玉米幼胚愈傷組織的誘導(dǎo)和植株再生的QTL分析[J]. 張紅偉,劉亞娟,郭曉琳,張峰,李建生,陳剛,孫東發(fā),譚振波.  作物學(xué)報. 2006(03)
[6]玉米幼胚培養(yǎng)能力性狀QTL分析[J]. 潘光堂,張志明,魏昕,宋蕓,趙茂俊,夏燕莉,榮廷昭.  作物學(xué)報. 2006(01)
[7]基因型及生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對玉米成熟胚培養(yǎng)的影響[J]. 曹俊梅,竇秉德,李生強(qiáng),陳莉,楊晉彬,白光紅.  淮陰師范學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版). 2005(02)
[8]玉米離體花藥培養(yǎng)體系的建立[J]. 付迎軍.  延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報. 2004(01)
[9]玉米幼胚培養(yǎng)胚性愈傷組織誘導(dǎo)力的遺傳變異分析[J]. 潘光堂,夏燕莉,劉玉貞,榮廷昭.  作物學(xué)報. 2003(03)
[10]玉米基因型與幼胚培養(yǎng)胚性愈傷組織發(fā)生能力的初步研究[J]. 母貴琴,潘光堂,劉玉貞,夏燕莉.  四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2003(01)

博士論文
[1]玉米幼胚胚性愈傷組織誘導(dǎo)能力全基因組遺傳解析及候選基因功能研究[D]. 羅旭.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]玉米胚性愈傷組織形成相關(guān)基因克隆及功能分析[D]. 孫麗芳.吉林大學(xué) 2012
[3]玉米核心自交系群體結(jié)構(gòu)及耐旱相關(guān)候選基因rab17的等位基因多樣性分析[D]. 于永濤.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2006
[4]玉米轉(zhuǎn)基因工程育種優(yōu)良受體篩選及遺傳機(jī)理研究[D]. 潘光堂.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004

碩士論文
[1]玉米再生候選基因ZmLEC1的序列變異及其與胚性愈傷形成能力的關(guān)聯(lián)分析[D]. 李釗.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]玉米耐旱相關(guān)候選基因dhn2與表型性狀的關(guān)聯(lián)分析[D]. 趙曦.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2008
[3]農(nóng)桿菌介導(dǎo)玉米自交系受體材料篩選及遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立[D]. 王鈺.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3327869