茶藨子葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）是引起山核桃干腐病的病原菌,易侵染枝干部位,造成全株死亡,導致嚴重經濟損失�？共∑贩N的培育過程中發(fā)現(xiàn)分別以湖南山核桃和美國山核桃為砧木、浙江山核桃為接穗的嫁接苗抗性好、產果率高,目前已廣泛種植,但關于其抗病機理還缺乏研究。前期研究發(fā)現(xiàn)發(fā)病嚴重的山核桃體內酚類物質以及相關酶——苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia-lyase,PAL）、過氧化物酶（Peroxidase,POD）和多酚氧化酶（Polyphenol oxidase,PPO）都比抗病山核桃品種中含量低,這些指標對抗病性的鑒定起重要作用,因此還需要對山核桃受B.dothidea侵染后抗性反應中酚類物質的合成開展進一步的研究。本研究以湖南嫁接山核桃（HG）、美國嫁接山核桃（AG）和浙江山核桃（ZJ）為材料,對接種B.dothidea后不同品種山核桃的感病情況和侵染狀況做分析;測定了不同品種中總酚、總黃酮的含量,并對與防御相關的酶活（PAL、PPO、POD、肉桂醇脫氫酶（Cinnamyl alcohol dehydrogenase,CAD）、細胞... 

【文章來源】：浙江農林大學浙江省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

AG山核桃.1山核桃總桃；4-6：HGRNA電泳圖

合測江山對分4.2.2因序測序結果，利山核桃的PA分析，序列長2.2山核桃P以3個品種序列，長度均利用DNAML全基因序長度和結構MFigMAL基因序種山核桃的均為2160bpMAN將序列序列。分別構同PAL其圖4.2Figure4.2PM:DL2000DN圖4.3山核gure4.3PCRM:DL2000DN序列分析的cDNA為模p，都包含37列拼接得到別命名為AG他分離物一山核桃PALCRproductoNAMarker;1桃PAL-RAproductofPANAMarker;1模板，將擴1個2160b美國嫁接山-PAL、HG一致�；騊CR產ofPALgene1,2:AG;3,4:HACE基因PCPAL-RACEge1,2:AG;3,4:H擴增的序列拼bp的開放閱山核桃、湖南-PAL和Z產物inpecanHG;5,6:ZJR產物eneinpecanHG;5,6:ZJ拼接得到3閱讀框(ORF南嫁接山核J-PAL，序段完整的F)，可編碼核桃和浙序列經比PAL基碼720個

394.2.2.3山核桃PAL基因的系統(tǒng)進化分析將本實驗獲得的3段PAL基因序列與其他植物的PAL基因進行多重序列比對，構建系統(tǒng)進化樹，如圖4.4顯示，三個品種的山核桃的PAL基因序列聚在一起，其中ZJ-PAL和AG-PAL的同源性較高，山核桃的PAL基因與胡桃科的核桃聚為一支，另外胡桃科與殼斗科的栓皮櫟、加州白櫟、板栗的同源性較近。桃樹和杏樹為一支，鹽膚木和阿月渾子均為漆樹科聚一支，楊柳科楊屬同源性較近聚為同一支。其余則為草本植物芍藥和藤本的葡萄為一個分支，它們與山核桃的同源關系較遠�？梢姴煌锓N間PAL基因的同源性有所差異，為同一科的植物聚為一支，木本植物與草本植物之間同源性有所差異。圖4.4山核桃PAL基因的系統(tǒng)發(fā)育分析Figure4.4PhylogeneticanalysisofthePALgeneinpecans4.2.3肉桂酸-4-羥基化酶(C4H)基因的克隆和分析4.2.3.1山核桃C4H基因的克隆以AG、HG和ZJ山核桃的樹皮結構為cDNA模板，根據(jù)設計的特異性引物擴增出PCR片段，得到3段C4H基因片段，分別命名為AG-C4H、HG-C4H和ZJ-C4H，條帶如圖4.5所示，3’RACE和5’RACE擴增片段的電泳檢測結果如圖4.6所示。結合測序結果，利用DNAMAN將序列拼接，通過BLAST序列在線比對，3個品種山核桃的序列長度和結構同該基因的其他分離物一致。

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]嫁接陸地棉查爾酮合成酶與查爾酮異構基因的克隆及表達分析[J]. 宋成攀,夏松波,王孝剛,張教海,秦鴻德,張友昌,馮常輝,別墅.  湖北農業(yè)科學. 2017(23)
[4]山核桃干腐病研究進展[J]. 劉錦,于煒.  浙江林業(yè)科技. 2017(06)
[5]推進生態(tài)化經營 助力山核桃產業(yè)可持續(xù)發(fā)展[J]. 周軍.  浙江林業(yè). 2017(04)
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[9]不同抗性水平水稻品種對紋枯病菌毒素的防衛(wèi)反應與生理差異[J]. 左示敏,陳夕軍,陳紅旗,徐艷,張家豪,陳羽,陳宗祥,童蘊慧,徐敬友,潘學彪.  中國水稻科學. 2014(05)
[10]桑樹肉桂酸-4-羥化酶基因（MmC4H）的克隆及在不同桑品種間的表達差異[J]. 黃滿芬,王恒,方榮俊,趙衛(wèi)國,張林,潘剛,劉利.  蠶業(yè)科學. 2014(04)

碩士論文
[1]嫁接山核桃抗干腐病生化機理研究[D]. 王盧燕.浙江農林大學 2018
[2]山核桃干腐病的生物學特性與控制研究[D]. 傅錦婷.浙江農林大學 2014
[3]山核桃干腐病病原菌的鑒定及其系統(tǒng)發(fā)育分析[D]. 王璇.浙江農林大學 2013
[4]河南省楊樹潰瘍病病原菌鑒定及生物學特性研究[D]. 崔曉琦.河南科技大學 2012
[5]橄欖葉黃酮合成相關基因cDNA的克隆[D]. 王云梅.福建農林大學 2009
[6]山核桃抗?jié)儾C理及其相關因素的研究[D]. 鄭宏兵.安徽農業(yè)大學 2004



本文編號：3327374