茶藨子葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）是引起山核桃干腐病的病原菌,易侵染枝干部位,造成全株死亡,導(dǎo)致嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失�？共∑贩N的培育過程中發(fā)現(xiàn)分別以湖南山核桃和美國山核桃為砧木、浙江山核桃為接穗的嫁接苗抗性好、產(chǎn)果率高,目前已廣泛種植,但關(guān)于其抗病機理還缺乏研究。前期研究發(fā)現(xiàn)發(fā)病嚴(yán)重的山核桃體內(nèi)酚類物質(zhì)以及相關(guān)酶——苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia-lyase,PAL）、過氧化物酶（Peroxidase,POD）和多酚氧化酶（Polyphenol oxidase,PPO）都比抗病山核桃品種中含量低,這些指標(biāo)對抗病性的鑒定起重要作用,因此還需要對山核桃受B.dothidea侵染后抗性反應(yīng)中酚類物質(zhì)的合成開展進(jìn)一步的研究。本研究以湖南嫁接山核桃（HG）、美國嫁接山核桃（AG）和浙江山核桃（ZJ）為材料,對接種B.dothidea后不同品種山核桃的感病情況和侵染狀況做分析;測定了不同品種中總酚、總黃酮的含量,并對與防御相關(guān)的酶活（PAL、PPO、POD、肉桂醇脫氫酶（Cinnamyl alcohol dehydrogenase,CAD）、細(xì)胞... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

AG山核桃.1山核桃總桃；4-6：HGRNA電泳圖

合測江山對分4.2.2因序測序結(jié)果，利山核桃的PA分析，序列長2.2山核桃P以3個品種序列，長度均利用DNAML全基因序長度和結(jié)構(gòu)MFigMAL基因序種山核桃的均為2160bpMAN將序列序列。分別構(gòu)同PAL其圖4.2Figure4.2PM:DL2000DN圖4.3山核gure4.3PCRM:DL2000DN序列分析的cDNA為模p，都包含37列拼接得到別命名為AG他分離物一山核桃PALCRproductoNAMarker;1桃PAL-RAproductofPANAMarker;1模板，將擴1個2160b美國嫁接山-PAL、HG一致。基因PCR產(chǎn)ofPALgene1,2:AG;3,4:HACE基因PCPAL-RACEge1,2:AG;3,4:H擴增的序列拼bp的開放閱山核桃、湖南-PAL和Z產(chǎn)物inpecanHG;5,6:ZJR產(chǎn)物eneinpecanHG;5,6:ZJ拼接得到3閱讀框(ORF南嫁接山核J-PAL，序段完整的F)，可編碼核桃和浙序列經(jīng)比PAL基碼720個

394.2.2.3山核桃PAL基因的系統(tǒng)進(jìn)化分析將本實驗獲得的3段PAL基因序列與其他植物的PAL基因進(jìn)行多重序列比對，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，如圖4.4顯示，三個品種的山核桃的PAL基因序列聚在一起，其中ZJ-PAL和AG-PAL的同源性較高，山核桃的PAL基因與胡桃科的核桃聚為一支，另外胡桃科與殼斗科的栓皮櫟、加州白櫟、板栗的同源性較近。桃樹和杏樹為一支，鹽膚木和阿月渾子均為漆樹科聚一支，楊柳科楊屬同源性較近聚為同一支。其余則為草本植物芍藥和藤本的葡萄為一個分支，它們與山核桃的同源關(guān)系較遠(yuǎn)。可見不同物種間PAL基因的同源性有所差異，為同一科的植物聚為一支，木本植物與草本植物之間同源性有所差異。圖4.4山核桃PAL基因的系統(tǒng)發(fā)育分析Figure4.4PhylogeneticanalysisofthePALgeneinpecans4.2.3肉桂酸-4-羥基化酶(C4H)基因的克隆和分析4.2.3.1山核桃C4H基因的克隆以AG、HG和ZJ山核桃的樹皮結(jié)構(gòu)為cDNA模板，根據(jù)設(shè)計的特異性引物擴增出PCR片段，得到3段C4H基因片段，分別命名為AG-C4H、HG-C4H和ZJ-C4H，條帶如圖4.5所示，3’RACE和5’RACE擴增片段的電泳檢測結(jié)果如圖4.6所示。結(jié)合測序結(jié)果，利用DNAMAN將序列拼接，通過BLAST序列在線比對，3個品種山核桃的序列長度和結(jié)構(gòu)同該基因的其他分離物一致。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]桉樹PAL基因克隆及焦枯病菌誘導(dǎo)下的表達(dá)分析[J]. 葉小真,楊婕,馮麗貞,江仲鵬,陸芝,劉雨菁,李麗紅,陳全助.  林業(yè)科學(xué)研究. 2019(06)
[2]植物誘導(dǎo)抗病及機制的研究進(jìn)展[J]. 李張,潘曉華,魏賽金.  生物災(zāi)害科學(xué). 2019(01)
[3]嫁接陸地棉查爾酮合成酶與查爾酮異構(gòu)基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 宋成攀,夏松波,王孝剛,張教海,秦鴻德,張友昌,馮常輝,別墅.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(23)
[4]山核桃干腐病研究進(jìn)展[J]. 劉錦,于煒.  浙江林業(yè)科技. 2017(06)
[5]推進(jìn)生態(tài)化經(jīng)營 助力山核桃產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展[J]. 周軍.  浙江林業(yè). 2017(04)
[6]植保素及其在增強作物抗性中的作用[J]. 陳東菊,安敏敏,李麗蘭,方繼朝,劉永鋒,羅玉明,楊立明.  分子植物育種. 2017(02)
[7]山核桃屬種間嫁接親和性分析[J]. 唐藝荃,王紅紅,胡淵淵,孫志超,徐沁怡,黃堅欽,王正加.  果樹學(xué)報. 2017(05)
[8]香豆素合成途徑關(guān)鍵酶基因Ghpal、Ghc4h和Gh4cl在棉花抗鏈格孢菌中的作用[J]. 張珊珊,翟偉卜,郭慧敏,張文蔚,簡桂良,齊放軍.  植物病理學(xué)報. 2017(02)
[9]不同抗性水平水稻品種對紋枯病菌毒素的防衛(wèi)反應(yīng)與生理差異[J]. 左示敏,陳夕軍,陳紅旗,徐艷,張家豪,陳羽,陳宗祥,童蘊慧,徐敬友,潘學(xué)彪.  中國水稻科學(xué). 2014(05)
[10]桑樹肉桂酸-4-羥化酶基因（MmC4H）的克隆及在不同桑品種間的表達(dá)差異[J]. 黃滿芬,王恒,方榮俊,趙衛(wèi)國,張林,潘剛,劉利.  蠶業(yè)科學(xué). 2014(04)

碩士論文
[1]嫁接山核桃抗干腐病生化機理研究[D]. 王盧燕.浙江農(nóng)林大學(xué) 2018
[2]山核桃干腐病的生物學(xué)特性與控制研究[D]. 傅錦婷.浙江農(nóng)林大學(xué) 2014
[3]山核桃干腐病病原菌的鑒定及其系統(tǒng)發(fā)育分析[D]. 王璇.浙江農(nóng)林大學(xué) 2013
[4]河南省楊樹潰瘍病病原菌鑒定及生物學(xué)特性研究[D]. 崔曉琦.河南科技大學(xué) 2012
[5]橄欖葉黃酮合成相關(guān)基因cDNA的克隆[D]. 王云梅.福建農(nóng)林大學(xué) 2009
[6]山核桃抗?jié)儾C理及其相關(guān)因素的研究[D]. 鄭宏兵.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號：3327374