發(fā)布時(shí)間：2021-08-07 06:39

　　分生組織的發(fā)育會(huì)影響植物的形態(tài)建成,而植株形態(tài)會(huì)極大影響園林植物的群落配置與景觀效果。為促進(jìn)沙柳（Salixpsammophila）的分子定向育種,研究其基因調(diào)控機(jī)理,本研究利用同源克隆技術(shù)克隆獲得沙柳SpsLAS2、SpsLAS3基因并做生物信息學(xué)及組織特異性表達(dá)分析,構(gòu)建35s::SpsLAS2與35s::SpsLAS3超量表達(dá)載體。通過(guò)Sitefinding-PCR技術(shù)克隆SpsLAS2基因的5’調(diào)控區(qū)序列片段并做序列分析。具體研究結(jié)果如下:1.通過(guò)同源克隆技術(shù)獲得沙柳SpLAS2與SpsLAS3基因的CDS序列,研究發(fā)現(xiàn)SpsLAS2和SpsLAS3基因序列相似性達(dá)96.69%,氨基酸序列相似性達(dá)97.6%。SpsLAS2和SpsLAS3基因ORF長(zhǎng)分別為1248、1254 bp,分別編碼415和417個(gè)氨基酸殘基。其氨基酸序列具有 GRS（GIBBERELLIN-INSENSITIVE,REPRESSOR of ga1-3,SCARECROW）基因家族典型的五個(gè)結(jié)構(gòu)域[1],屬LS亞家族。2.同源蛋白序列比對(duì)與系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建表明,沙柳SpsLAS2、SpsLAS3蛋白序列與歐... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＧＡＲＳ蛋白分子結(jié)構(gòu)［６２］??６

Ｂｏｌｌｅ［６６］等對(duì)模式植物擬南芥和水稻的基因家族進(jìn)行進(jìn)化分析，將Ｇ兄４５??基因家族劃分為８?jìng)�(gè)亞家族：Ｌ／ＳＣＸ、別７７、ＳＣｉ３、Ｚ）￡ＸＺ＾、Ｓｄ?＊Ｓ７／ｉ？、ｉ＾和／ＭＭ??（如圖２）。他＾＾［６７］等通過(guò)進(jìn)化樹(shù)分析將０反八３基因家族分為１３個(gè)亞家族乂＿７７、??ＡｔＳＣＬ４／７、ＡｔＳＣＬ９、ＡｔＳＨＲ、ＨＡＭ、ＡｔＬＡＳ、ＡｔＳＣＲ、Ａ－ｔＳＣＬ３、ＡｔＳＣＬ２８、ＤＥＬＬＡ、??尸ｄ?ＯＭ和付。其研究結(jié)果表明不同植物中基因家族序列存在高度相??似性，這表明該家族在植物中可能是通過(guò)串聯(lián)復(fù)制產(chǎn)生重復(fù)基因而進(jìn)行進(jìn)化的。由??于序列高度保守，同一亞家族成員在功能上也具有相似性或相關(guān)性。??—ｒ？纖＂ｄｉｍ念｛５】於??一―—二…?，＾?１?■歲?Ａｔ?????????????．．．．．．－ｐ：：＝ｚ：ｒｒ：??ｒ－———?＆￣ｃｒｒｚ?ｉｔ?ＳＳ??＇?｛?４??ｉ＊獅哪料．：ｐ雄．＊貧??一卿—一？ｎ￡＾ｃｒ＝??ｒ———————屬｜￡??＇１．…—Ｉ?＾?ｊｒＵＩ－－ｃｚｚｚ??ｌ￣ｎ?ｒ??ｔｍ??ｉ＾ｃｚｒ：念雜??Ｍｇ＾ｊＬＪｋ?緣?Ｉ?ｌ…．．－???…＇『一一＜？麵務(wù)??－?１?．“、＞？、—??Ｌ．．．．，，，，．．．，．，＾ＷＯａ－＾??－．一一一．．．???一ｒ°—？？＂？＊＊＊?？〇？＃???—?？＾Ｐ１＇??ｆ＿＿纖＾＾娘??ｘｍｕｕ＾一????＾，ｒ－＾Ｃ：?－：：？：?ＳＳ??瞻?Ｌ??ｉ?「￣？Ｍ＝ｎＳｓｉ??—?＊?￣７＝＝ｍ

采用?Ｔｈｅｒｍｏ?Ｆｉｓｈｅｒ?公司生產(chǎn)的?ＧｅｎｅＪＥＴ?Ｐｌａｎｔ?ＲＮＡ?Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ｋｉｔ?試劑盒進(jìn)行??沙柳總ＲＮＡ的提取。采用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行濃度檢測(cè)，濃度為２７７８?ｎｇ／ｐｌ電泳結(jié)??果顯示２８?ｓ條帶亮度約是１８?ｓ處的兩倍（如圖３），說(shuō)明ＲＮＡ提取質(zhì)量較好。??１??２８ｓ—ｉ，??１８ｓ—??—??圖３沙柳總ＲＮＡ電泳圖??Ｆｉｇ．３?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ?ｏｆ?Ｓａｌｉｘ?ｐｓａｍｍｏｐｈｉｌａ??３．?１．２設(shè)計(jì)及測(cè)試引物結(jié)果??提取沙柳全株ＲＮＡ并進(jìn)行ｃＤＮＡ第一鏈的合成，以ｃＤＮＡ第一鏈為模板，利??用所設(shè)計(jì)的５’端ＵＴＲ區(qū)引物與３＇端ＵＴＲ區(qū)引物，在２０?｜ｉｌ?Ｐｆｕ高保真酶體系下進(jìn)行??ＰＣＲ的擴(kuò)增，得到目標(biāo)條帶，利用Ｔｒａｎｓ２Ｋ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ進(jìn)行長(zhǎng)度判斷，目標(biāo)條帶??為預(yù)估約為１５００?ｂｐ左右，實(shí)際亮度條帶在１０００?ｂｐ與２０００?ｂｐ之間，約為１５００?ｂｐ??符合預(yù)估條件（如圖４）。??Ｍ?１??２?ｏｏｏｂ?ｐ??滅＿??圖４目標(biāo)基因擴(kuò)增電泳檢測(cè)??Ｆｉｇ．?４?Ｅｌｅｃｔｒｏｆｈｏｒｅｓｉｓ?ｐａｔｔｅｒｎ?ｏｆ?ｔａｒｇｅｔ?ｇｅｎｅ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]Cd脅迫對(duì)水稻生長(zhǎng)及內(nèi)源激素含量的影響[J]. 游來(lái)勇,王昌全,羅娟,李冰,曾建.  生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào). 2015(05)

博士論文
[1]簸箕柳基因組測(cè)序及功能基因研究[D]. 戴曉港.南京林業(yè)大學(xué) 2017
[2]楊柳分化及其性別決定的基因組學(xué)基礎(chǔ)[D]. 侯靜.南京林業(yè)大學(xué) 2016
[3]煙草腋芽發(fā)育相關(guān)基因的克隆與功能分析[D]. 陳雅瓊.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015
[4]楊樹(shù)miRNA基因家族進(jìn)化與靶基因研究[D]. 劉志祥.中南林業(yè)科技大學(xué) 2013
[5]楊柳木材纖維增強(qiáng)沙柳材中密度纖維板基礎(chǔ)理論與關(guān)鍵技術(shù)研究[D]. 李奇.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[6]沙柳沙障腐蝕過(guò)程及防腐抗蝕效果研究[D]. 龔萍.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]北沙柳種質(zhì)資源的多樣性分析與優(yōu)良無(wú)性系篩選[D]. 張瑋.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[8]甘藍(lán)型油菜GRAS家族基因BnLAS的分離和功能分析[D]. 楊明貴.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[9]庫(kù)布齊沙漠沙柳培育關(guān)鍵技術(shù)研究[D]. 米志英.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008

碩士論文
[1]沙柳SpsFUCT基因的克隆、組織特異性表達(dá)及表達(dá)載體構(gòu)建[D]. 楊楊.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]沙柳SpsLAS基因克隆、組織特異性表達(dá)及表達(dá)載體構(gòu)建[D]. 路東曄.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]不同平茬高度對(duì)沙柳生長(zhǎng)狀況的影響研究[D]. 馬天琴.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]8種柳屬植物微體快繁關(guān)鍵技術(shù)的研究[D]. 崔敏.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 2017
[5]沙柳TAC1基因克隆與生物信息學(xué)及組織表達(dá)特性分析[D]. 馬月林.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[6]兩種芋蘭分枝發(fā)育相關(guān)基因LS及其調(diào)控區(qū)的克隆與表達(dá)分析[D]. 陳秀珍.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[7]沙柳基活性炭對(duì)水體中染料和酚類物質(zhì)的吸附研究[D]. 劉靜萱.鄭州大學(xué) 2016
[8]沙柳組培快繁和再生體系建立的初步研究[D]. 敖敦.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[9]不同生境對(duì)園林植物構(gòu)型的影響[D]. 陳夢(mèng)依.福建農(nóng)林大學(xué) 2015
[10]AtNAC1轉(zhuǎn)錄因子的分子建模和鐵皮石斛NAC家族基因的克隆及表達(dá)分析[D]. 朱乾坤.西南交通大學(xué) 2014



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