核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域受體（NOD-like receptors,NLRs）是先天性免疫中病原識別受體之一,在機(jī)體防御中起著重要作用。NLRP6是NOD樣家族中一類作用機(jī)理比較特別的蛋白,在免疫中的作用與其調(diào)節(jié)caspase-1和NF-κB活性的能力有關(guān)。本試驗以豬NLRP6基因為研究對象。依據(jù)豬NLRP6全基因核苷酸序列（GenBank登錄號:XM-003124236.4）設(shè)計特異性引物,利用PCR從pMD-19T-NLRP6重組載體中擴(kuò)增獲得NLRP6基因,將該基因片段連接到原核表達(dá)載體pET-32a（+）中,獲得重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32a-NLRP6,通過抗性篩選、酶切、PCR鑒定重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒pET-32a-NLRP6轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Rosetta（DE3）感受態(tài)細(xì)胞,IPTG誘導(dǎo)其高效表達(dá),獲得分子量大小約為34KDa的以包涵體形式存在的NLRP6重組融合蛋白,Western blot結(jié)果表明其與小鼠抗6×His單克隆抗體呈陽性反應(yīng)。NLRP6重組融合蛋白經(jīng)鎳離子柱純化、變性和復(fù)性后,即獲得了可溶性NLRP6重組融合蛋白。以純化的融合蛋白作為抗原,按合理免疫程序免疫BAL... 

【文章來源】：天津農(nóng)學(xué)院天津市

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

NLRP6分子結(jié)構(gòu)

pET-32a（+）載體的限制性酶切圖和多克隆位點Fig.2-1RestrictionmapsandmultiplecloningsitesofthepET-32a(+)vector

NLRP目的片段PCR擴(kuò)增Fig.2-2PCRamplificationofNLRPtargetfragment


本文編號：3322438