目的克隆表達(dá)細(xì)粒棘球絳蟲肌動(dòng)蛋白（EgACT）基因,并獲得EgACT純化蛋白。方法將經(jīng)全序列合成、密碼子優(yōu)化合成的目的基因EgACT克隆入PET28a-SUMO表達(dá)載體中、轉(zhuǎn)化入Rosetta（DE3）中,誘導(dǎo)表達(dá)采用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）,經(jīng)鎳瓊脂糖凝膠親和層析法獲得純化蛋白。結(jié)果重組質(zhì)粒PET28a-SUMO-EgACT構(gòu)建成功。SDS-PAGE結(jié)果顯示,目的蛋白在Rosetta（DE3）中獲得高效表達(dá),相對(duì)分子量約為60 kDa。結(jié)論完成細(xì)粒棘球絳蟲肌動(dòng)蛋白基因的克隆及其在Rosetta（DE3）中的表達(dá),并獲得純化蛋白。 

【文章來源】：中國高原醫(yī)學(xué)與生物學(xué)雜志. 2020,41(02)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒p ET28a-SUMO-Eg ACT酶切鑒定圖

誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果表明，EgA CT蛋白在20℃和37℃沉積物中具有可見帶(圖2)。利用鎳瓊脂凝膠親和色譜法進(jìn)行蛋白質(zhì)純化，EgA CT蛋白在500 mM咪唑濃度時(shí)，被大量洗脫下來(圖3)。圖3 鎳瓊脂糖親和層析SDS-PAGE分析圖

鎳瓊脂糖親和層析SDS-PAGE分析圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肝包蟲病診斷及治療進(jìn)展[J]. 譚鈞文,唐健,趙明星,宮金偉,孫繼勇,趙孝波.  肝臟. 2019(10)
[2]剛地弓形蟲肌動(dòng)蛋白基因的克隆與表達(dá)[J]. 李潤花,郝海霞,王海龍,孟曉麗,申金雁,殷國榮.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2013(05)
[3]細(xì)粒棘球絳蟲烯醇酶基因克隆 表達(dá)及免疫診斷研究[J]. 王瑩,張璟,袁忠英,周何軍,沈玉娟,徐馀信,王燕娟,伍衛(wèi)平,曹建平.  中國血吸蟲病防治雜志. 2012(05)
[4]亞洲帶絳蟲60S核糖體蛋白L8基因的克隆表達(dá)和免疫學(xué)分析[J]. 王宇,戴佳琳,黃江,廖興江.  中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2011(08)
[5]細(xì)胞核內(nèi)肌動(dòng)蛋白參與基因轉(zhuǎn)錄的研究進(jìn)展[J]. 王洪振,程焉平.  吉林師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2005(02)
[6]囊型棘球蚴和泡型棘球蚴不同組織抗原可溶性蛋白SDS—PAGE電泳分析[J]. 江莉,溫浩,李雄,依斯拉音·烏斯曼,嚴(yán)雷.  地方病通報(bào). 1998(01)



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