發(fā)布時(shí)間：2021-07-31 23:02

　　目的構(gòu)建Tet-on調(diào)控BMP-2基因腺病毒載體,并對其相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行鑒定,為骨質(zhì)疏松性骨折的基因治療提供新的方法。方法以含有目的基因的pDC315-BMP-2質(zhì)粒為模板,將目的基因克隆至pAdenoX-Tet-On 3G Vector中,構(gòu)建pAdenoBMP-2-Tet-On表達(dá)質(zhì)粒。將構(gòu)建的pAdenoBMP-2-Tet-On表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Adeno-X 293細(xì)胞,完成腺病毒擴(kuò)增,PCR鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物,并利用Adeno-X Rapid Titer Kit檢測病毒滴度。結(jié)果酶切及PCR結(jié)果顯示BMP-2被成功導(dǎo)入Tet-on腺病毒載體中,并成功轉(zhuǎn)染Adeno-X 293細(xì)胞,包裝及擴(kuò)增后得到Tet-on調(diào)控BMP-2基因的腺病毒載體,滴度為1x1010ifu/ml。結(jié)論成功構(gòu)建了Tet-on調(diào)控BMP-2基因的腺病毒載體。 

【文章來源】：江西醫(yī)藥. 2020,55(12)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

對p DC315-BMP-2質(zhì)粒酶切后成功獲得1233bp BMP-2基因片段（產(chǎn)物1)

Pac I酶消化后得到特征DNA條帶

CTG083-P4 Adenovirus (2014.01.02),1000ul,6x109ifu/ml圖4 重組腺病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，培養(yǎng)1周取細(xì)胞裂解產(chǎn)物行3%瓊脂凝膠電泳，表明重組腺病毒所含目的基因成功轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)

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