目的檢測LDOC1在結(jié)腸癌中的表達情況,并研究其對結(jié)腸癌的生物學功能的影響及相關(guān)分子機制。為結(jié)腸癌的早期診斷和有效治療提供新的靶點。方法通過實時熒光定量PCR和免疫組化方法檢測LDOC1在結(jié)腸癌組織中的表達情況,再利用RT-PCR方法檢測LDOC1在結(jié)腸癌細胞中的表達情況。將LDOC1過表達慢病毒和空病毒轉(zhuǎn)染至Caco2和HCT-116結(jié)腸癌細胞后,通過RT-PCR和western-bolt檢測轉(zhuǎn)染效率,運用CCK-8、克隆形成、流式細胞術(shù)、Transwell等實驗,分別檢測LDOC1對細胞增殖、周期、凋亡、遷移和侵襲的影響。通過Western-blot和細胞免疫熒光檢測凋亡相關(guān)蛋白、Wnt/β-catenin信號通路及EMT相關(guān)分子的表達。最后加入Wnt通路激活劑IM-12后,通過Western-blot實驗再次檢測Wnt/β-catenin信號通路及EMT相關(guān)分子的表達。結(jié)果LDOC1在結(jié)腸癌組織和4株結(jié)腸癌細胞中均呈現(xiàn)出低表達。過表達LDOC1后,Caco2和HCT-116細胞的增殖、遷移和侵襲能力明顯降低,細胞周期阻滯而凋亡率明顯增加。同時,過表達LDOC1后,促凋亡蛋白明顯增... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

LDOC1在結(jié)腸癌組織及正常結(jié)腸組織中的表達Figure1:TheexpressionlevelsofLDOC1incoloncancertissuesandnormalcolontissues.

圖 1：LDOC1 在結(jié)腸癌組織及正常結(jié)腸組織中的表達igure 1: The expression levels of LDOC1 in colon cancer tissues and normal colon tiss LDOC1 在結(jié)腸癌細胞中表達呈顯著下降通過 RT-PCR 的方法，我們檢測了 LDOC1 在 4 株結(jié)腸癌細胞中的表達顯示相對于正常結(jié)腸組織，LDOC1mRNA 在結(jié)腸癌細胞中表達呈顯著下.05，圖 2）。

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文3.3 慢病毒轉(zhuǎn)染效率的驗證通過慢病毒感染構(gòu)建了穩(wěn)定表達 LDOC1 的結(jié)腸癌細胞株（HCT-116、Caco2），分別提取兩株細胞的總 mRNA 和總蛋白，通過 RT-PCR 和 Western-bolt 實驗驗證慢病毒的轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果顯示，相較于對照組（Lv-NC），實驗組（Lv-LDOC1）的 LDOC1mRNA 和蛋白表達明顯上調(diào)(*P＜0.05，**P＜0.01，圖 3 A-B)。


本文編號：3312148