星形膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因-1（astrocyte upregulating gene-1,AEG-1）是HIV伴隨老年癡呆患者腦組織中發(fā)現(xiàn)的星形膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因之一,近年來研究表明其調(diào)控多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,但其在學(xué)習(xí)認(rèn)知上的研究尚未見報(bào)道。海馬和皮質(zhì)在學(xué)習(xí)認(rèn)知中起重要作用,利用CRISPR/Cas9技術(shù)結(jié)合Cre/loxp系統(tǒng)構(gòu)建海馬皮質(zhì)特異性AEG-1敲除小鼠,在此模型鼠的基礎(chǔ)上對AEG-1和學(xué)習(xí)認(rèn)知的相關(guān)性進(jìn)行初步研究。首先構(gòu)建插入loxp位點(diǎn)的flox純合型AEG-1^fl/fl小鼠,與海馬、新皮層特異性表達(dá)Cre^+/+重組酶的工具鼠進(jìn)行繁育,利用PCR技術(shù)篩選出子代基因型為AEG-1^fl/flCre⁺的海馬皮質(zhì)特異性AEG-1敲除小鼠;然后利用Western blot技術(shù)和免疫熒光技術(shù)檢測AEG-1基因在小鼠海馬皮質(zhì)中的敲除效率;最后應(yīng)用新物體識(shí)別箱和三腔社會(huì)互動(dòng)箱并結(jié)合SMART 3.0分析系統(tǒng),對海馬皮質(zhì)特異性AEG-1敲除小鼠的學(xué)習(xí)記憶和社會(huì)交互行為學(xué)進(jìn)行初步評價(jià)。結(jié)果顯示:成功獲得子代基... 

【文章來源】：中國生物工程雜志. 2020,40(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【圖文】：

AEG-1flox小鼠構(gòu)建策略

AEG-1flox小鼠引物設(shè)計(jì)圖

圖3所示，基因型為AEG-1fl/fl的小鼠與海馬、皮層特異性Cre+小鼠雜交。利用200μl GA緩沖液和20μl proteinase K溶解組織，待組織完全溶解后，利用組織DNA提取試劑盒進(jìn)一步進(jìn)行DNA的提取。通過PCR技術(shù)鑒定小鼠基因型，AEG-1fl/fl和Cre+均為陽性者為試驗(yàn)組小鼠(表2為鑒定AEG-1fl/fl Cre+所用引物)。1.2.3 PCR反應(yīng)鑒定小鼠基因型


本文編號：3308420