兩棲動物的性腺分化是當今發(fā)育生物學的研究熱點。兩棲動物屬于變溫動物,其生長和性腺分化均受到環(huán)境溫度的影響,研究溫度對兩棲動物的生長和性腺分化的影響,對于兩棲動物保護具有重要的理論價值。本文在大鯢（Andrias davidianus）幼體適宜生長的水溫范圍內,設置了 14℃、21℃、24℃等3個水溫梯度,分3次測量每個水溫梯度下大鯢幼體的體重,采用石蠟切片、HE染色技術對其進行性別鑒定,旨在探究水溫對大鯢幼體生長與性腺分化的影響。在性別鑒定的同時,依據(jù)本實驗室高通量轉錄組測序數(shù)據(jù)篩選出的差異表達基因,選取了與性別分化相關的基因Wnt4,采用原位雜交技術對Wnt4在大鯢幼體精巢和卵巢中的表達進行了定位,還運用實時定量PCR技術、Western Bolt技術對Wnt4 的表達進行了定量,以此來探究Wnt4在大鯢幼體精巢和卵巢中的表達差異及水溫變化對Wnt4表達量的影響。主要結果與結論如下:1.水溫對大鯢幼體生長的影響。大鯢幼體在14℃水溫下生長最慢,24℃次之,21℃最快;在3個水溫梯度條件下,大鯢幼體生長速度差異顯著（P<0.05）。表明在14℃～2 1℃水溫范圍內,大鯢幼體的生長... 

【文章來源】：陜西師范大學陜西省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１熒光實吋定量程序圖??Ｆｉｇ．３－１?Ｐｒｏｔｏｃｏｌ?ｆｏｒ?ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ??

－５３?１３４／１４２（９４？／〇）?１／１４２（０％）?Ｐｌｕｓ／Ｐｌｕｓ??Ｑｕｅｒｙ?５?ＧＣＴＧＧ－ＣＧＴＧＡＣＣＴＧＡＣＡＧＡＣＴＡＣＣＴＣＡＴＧＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＴＧＡＧＡＧ＜ＷＧＣＴＡＣＡＧＣＴＴＣ?Ｓ３??Ｑｕｅｒｙ?６４?ＡＣＡＡＣＣＡＣＡＧＣＣＧＡＭＧＧＧＡＡＡＴＴＧＴＧＣＧＴＧＡＴＣＴＣＡＡＡＧＡＡＡＡＧＣＴＣＴＧＣＴＡＴＧＴＣＧＣＣ?１２３??Ｑｕｅｒｙ?１２４?ＣＴＷＡＣＴＴＴＧＡＧＣＡＧＧＡＡＡＴＧＧ?１４５??ＴＴ，?ＳＳｌｉｌｉｉｉ?ＴＯ５??圖３－６大鯢與紅腹蠑螈Ｐ－ａｃｔｉｎ基因序列的比對??Ｆｉｇ．３－６?Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?Ｃｙｎｏｐｓ?ｐｙｒｒｈｏｇａｓｔｅｒ?＾－ａｃｔｉｎ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?Ｃｈｉｎｅｓｅ?ｇｉａｎｔ?ｓａｌａｍａｎｄｅｒ??３．２．４藍白斑篩癬質粒線性化以及探針的制備??將２個含氨芐青霉素的固體培養(yǎng)基于３７°Ｃ培養(yǎng)過夜，次日觀察到２個培養(yǎng)皿??中均有藍斑和白斑。顏色區(qū)分明顯，菌落長勢較好。??【Ｕ??圖３－７階基因克隆菌落圖??Ｆｉｇ．３－７?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｃｏｌｏｎｙ?ｏｆ?Ｗｎｔ４?ｇｅｎｅ?ｃｌｏｎｅ??注：圖中１和２均為基因克隆菌落圖??３．２．５質粒測序??ＰＣＲ擴增序列與ｐＧＥＭ？－Ｔ?Ｅａｓｙ?Ｖｅｃｔｏｒ連接后，導入大腸桿菌ＤＨ５ａ感受態(tài)??細胞，提取重組質粒ＤＮＡ，送至西安擎科生物有限公司測序，測序結果如下：??ＡＴＴＣＣＡＧＴＧＧＴＣＴＧＧＣＴＧＴＴＣＡＧＡＴＡＡＣＡＴＴＧＣＣＴＡＴＧＧＴＧＴＧＧＣＡＴＴＣＴＣＡＣ??３２??

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本文編號：3306966