兩棲動(dòng)物的性腺分化是當(dāng)今發(fā)育生物學(xué)的研究熱點(diǎn)。兩棲動(dòng)物屬于變溫動(dòng)物,其生長(zhǎng)和性腺分化均受到環(huán)境溫度的影響,研究溫度對(duì)兩棲動(dòng)物的生長(zhǎng)和性腺分化的影響,對(duì)于兩棲動(dòng)物保護(hù)具有重要的理論價(jià)值。本文在大鯢（Andrias davidianus）幼體適宜生長(zhǎng)的水溫范圍內(nèi),設(shè)置了 14℃、21℃、24℃等3個(gè)水溫梯度,分3次測(cè)量每個(gè)水溫梯度下大鯢幼體的體重,采用石蠟切片、HE染色技術(shù)對(duì)其進(jìn)行性別鑒定,旨在探究水溫對(duì)大鯢幼體生長(zhǎng)與性腺分化的影響。在性別鑒定的同時(shí),依據(jù)本實(shí)驗(yàn)室高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)篩選出的差異表達(dá)基因,選取了與性別分化相關(guān)的基因Wnt4,采用原位雜交技術(shù)對(duì)Wnt4在大鯢幼體精巢和卵巢中的表達(dá)進(jìn)行了定位,還運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)、Western Bolt技術(shù)對(duì)Wnt4 的表達(dá)進(jìn)行了定量,以此來(lái)探究Wnt4在大鯢幼體精巢和卵巢中的表達(dá)差異及水溫變化對(duì)Wnt4表達(dá)量的影響。主要結(jié)果與結(jié)論如下:1.水溫對(duì)大鯢幼體生長(zhǎng)的影響。大鯢幼體在14℃水溫下生長(zhǎng)最慢,24℃次之,21℃最快;在3個(gè)水溫梯度條件下,大鯢幼體生長(zhǎng)速度差異顯著（P<0.05）。表明在14℃～2 1℃水溫范圍內(nèi),大鯢幼體的生長(zhǎng)... 

【文章來(lái)源】：陜西師范大學(xué)陜西省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１熒光實(shí)吋定量程序圖??Ｆｉｇ．３－１?Ｐｒｏｔｏｃｏｌ?ｆｏｒ?ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ??

－５３?１３４／１４２（９４？／〇）?１／１４２（０％）?Ｐｌｕｓ／Ｐｌｕｓ??Ｑｕｅｒｙ?５?ＧＣＴＧＧ－ＣＧＴＧＡＣＣＴＧＡＣＡＧＡＣＴＡＣＣＴＣＡＴＧＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＴＧＡＧＡＧ＜ＷＧＣＴＡＣＡＧＣＴＴＣ?Ｓ３??Ｑｕｅｒｙ?６４?ＡＣＡＡＣＣＡＣＡＧＣＣＧＡＭＧＧＧＡＡＡＴＴＧＴＧＣＧＴＧＡＴＣＴＣＡＡＡＧＡＡＡＡＧＣＴＣＴＧＣＴＡＴＧＴＣＧＣＣ?１２３??Ｑｕｅｒｙ?１２４?ＣＴＷＡＣＴＴＴＧＡＧＣＡＧＧＡＡＡＴＧＧ?１４５??ＴＴ，?ＳＳｌｉｌｉｉｉ?ＴＯ５??圖３－６大鯢與紅腹蠑螈Ｐ－ａｃｔｉｎ基因序列的比對(duì)??Ｆｉｇ．３－６?Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?Ｃｙｎｏｐｓ?ｐｙｒｒｈｏｇａｓｔｅｒ?＾－ａｃｔｉｎ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?Ｃｈｉｎｅｓｅ?ｇｉａｎｔ?ｓａｌａｍａｎｄｅｒ??３．２．４藍(lán)白斑篩癬質(zhì)粒線性化以及探針的制備??將２個(gè)含氨芐青霉素的固體培養(yǎng)基于３７°Ｃ培養(yǎng)過(guò)夜，次日觀察到２個(gè)培養(yǎng)皿??中均有藍(lán)斑和白斑。顏色區(qū)分明顯，菌落長(zhǎng)勢(shì)較好。??【Ｕ??圖３－７階基因克隆菌落圖??Ｆｉｇ．３－７?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｃｏｌｏｎｙ?ｏｆ?Ｗｎｔ４?ｇｅｎｅ?ｃｌｏｎｅ??注：圖中１和２均為基因克隆菌落圖??３．２．５質(zhì)粒測(cè)序??ＰＣＲ擴(kuò)增序列與ｐＧＥＭ？－Ｔ?Ｅａｓｙ?Ｖｅｃｔｏｒ連接后，導(dǎo)入大腸桿菌ＤＨ５ａ感受態(tài)??細(xì)胞，提取重組質(zhì)粒ＤＮＡ，送至西安擎科生物有限公司測(cè)序，測(cè)序結(jié)果如下：??ＡＴＴＣＣＡＧＴＧＧＴＣＴＧＧＣＴＧＴＴＣＡＧＡＴＡＡＣＡＴＴＧＣＣＴＡＴＧＧＴＧＴＧＧＣＡＴＴＣＴＣＡＣ??３２??

ＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＴＴＴ??ｉｉ?ｉｉｉ?ｉ?ｉｉｉｉｉｉ??ｌ??ＴＡＣＴＣＡＧＴＧＴＧＧＣＴＴＣＴＣＧＣＡＴＣＴＴＴ??６１?ＴＧＴＴ０ＡＴ０Ｔ０ＡＧＧ０ＡＧＡＧＡＡＧＣＡＡＡ００Ａ０ＣＧＴＣＣＴＣＴＧＧＣＡＧＡＧＣＴＣＴＣＡＴＧＡＡＴＣＴＴＣＡ??ｉｉｉｉｉｉｍｉｍＭｉｉＭｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉＭｉｉｉｉｍｉｉｉｉ??２７?ＴＧｎＧＡＴＧＴＧＡＧＧＧＡＧＡＧＡＡＧＣＡＡＡＧＧＡＧＣＧＴＣＣＴＣＴＧＧＣＡＧＡＧＣＴＣＴＣＡＴＧＭＴＣＴＴａ??圖３－８質(zhì)粒克隆寫(xiě)基因ＰＣＲ序列的比對(duì)??Ｆｉｇ．３－８?Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?Ｗｎｔ４?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｃｌｏｎｅ??３．２．６質(zhì)粒線性化??將質(zhì)粒以及質(zhì)粒線性化之后的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果表明Ｐｓｔ?Ｉ??將環(huán)狀質(zhì)粒切割開(kāi)。??圖３－９質(zhì)粒線性化前后的比對(duì)??Ｆｉｇ．３－９?Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｌｉｎｅａｒｉｚａｔｉｏｎ?ｆｒｏｍ?ｂｅｆｏｒｅ?ａｎｄ?ａｆｔｅｒ??３３??


本文編號(hào)：3306966