α-L-鼠李糖苷酶（EC 3.2.1.40）是一種糖苷水解酶,它能夠特異性水解非還原性末端的鼠李糖基。目前α-L-鼠李糖苷酶廣泛地應(yīng)用于食品、制藥、化工等行業(yè),市場前景廣闊。微生物來源的α-L-鼠李糖苷酶一般都需要誘導(dǎo)物的誘導(dǎo)來促進(jìn)產(chǎn)酶,但同時還伴隨有β-葡萄糖苷酶產(chǎn)生,混合酶不僅存在純化困難的問題還對后續(xù)應(yīng)用造成不便。因此,得到單一并且催化效率高的α-L-鼠李糖苷酶就顯得十分必要。本課題組前期分離得到一株黑曲霉菌株NCU-317,在進(jìn)行誘導(dǎo)產(chǎn)α-L-鼠李糖苷酶的同時也有β-葡萄糖苷酶的產(chǎn)生。因此本研究擬通過現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建工程菌的方法來解決上述存在的問題。本論文主要結(jié)果如下:1、通過改變文獻(xiàn)廣泛報道的液體搖瓶為固體平板培養(yǎng)方法,提取到了完整的總RNA,隨后采用改進(jìn)的RACE技術(shù)并結(jié)合設(shè)計了特異性的接頭引物,并充分運用了TdT末端轉(zhuǎn)移酶的性質(zhì),還運用了Nested PCR、Touch-down PCR來提高RACE技術(shù)的穩(wěn)定性和可靠性。經(jīng)過實驗發(fā)現(xiàn)此改良后的RACE法應(yīng)用于黑曲霉中α-L-鼠李糖苷酶基因調(diào)取效果良好。2、以前期得到的黑曲霉NCU-317 cDNA為模板,通過普通P... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

翻轉(zhuǎn)型和保持型糖苷酶作用機(jī)理圖

1.2 α-L-鼠李糖苷酶常見水解底物結(jié)構(gòu)；A：柚皮苷；B：槲皮苷；C：新橙皮苷；D��；E：枸橘苷；F：橘皮苷；G：燕麥皂苷 AFig 1.2 Structures of seven substrates hydrolyzed by α-L-rhamnosidase. A: naringin, B:hesperidin, C: neohesperidin, D: rutin, E: poncirin, F: quercitrin, G: avenacoside A.

表達(dá)載體圖示

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黑曲霉所產(chǎn)α-L-鼠李糖苷酶酶學(xué)性質(zhì)及其在異槲皮素制備上應(yīng)用[J]. 鄔子彬,劉科梅,胡基志,陸豫,余勃.  食品工業(yè)科技. 2018(01)
[2]塔賓曲霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中α-L-鼠李糖苷酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)分析[J]. 高庭,李利君,王聳,吳喆瑜,張文靜,倪輝.  食品工業(yè)科技. 2016(15)
[3]從黑曲霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中純化α-L-鼠李糖苷酶及酶法制備普魯寧[J]. 胡群芳,李利君,陳艷紅,倪輝,肖安風(fēng),陳峰,蔡慧農(nóng).  現(xiàn)代食品科技. 2015(01)
[4]一種高效獲取基因5′末端的RACE方法[J]. 羅聰,何新華,陳虎,韋泳麗,李明娟.  植物生理學(xué)報. 2011(04)
[5]黑曲霉DB056發(fā)酵α-鼠李糖苷酶和柚苷酶培養(yǎng)基的優(yōu)化研究[J]. 吳升山,蔡慧農(nóng),蘇文金,倪輝,李利君,肖安風(fēng).  中國食品學(xué)報. 2010(04)
[6]羊肝源穿山龍薯蕷皂苷-α-L-鼠李糖苷酶的分離及其動力學(xué)特性[J]. 王紅英,錢斯日古楞,魚紅閃,臧姝,金鳳燮.  高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報. 2007(04)
[7]蘆丁-α-鼠李糖苷酶分離提純及其酶性質(zhì)[J]. 王侃,魚紅閃,金鳳燮.  大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報. 2004(01)
[8]人參皂甙-α-鼠李糖苷酶分離提純及其酶性質(zhì)[J]. 金贊敏,魚紅閃,金鳳燮.  大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報. 2003(02)

碩士論文
[1]α-L-鼠李糖苷酶生產(chǎn)菌株的篩選及其應(yīng)用[D]. 鄔子彬.南昌大學(xué) 2018
[2]黑曲霉JMU-TS528菌株的α-L-鼠李糖苷酶基因的克隆和表達(dá)分析[D]. 張霞.集美大學(xué) 2014
[3]腸球菌中α-L-鼠李糖苷酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究[D]. 王艷君.山東輕工業(yè)學(xué)院 2011



本文編號：3306290