發(fā)布時間：2021-07-26 09:24

　　第一部分中國漢族帕金森病患者LRRK2基因變異分析目的:帕金森�。≒arkinson’s disease,PD）的發(fā)病機(jī)制尚不明確,目前認(rèn)為與遺傳因素、環(huán)境因素及老化等因素交互作用相關(guān),其中遺傳因素越來越受到關(guān)注。富含亮氨酸重復(fù)序列激酶2（leucine-rich repeat kinase 2 gene,LRRK2）突變是PD患者常染色體顯性遺傳中最常見基因突變,在家族性及散發(fā)性PD患者中均起著重要作用。對PD患者LRRK2基因變異分析及臨床特點研究有助于進(jìn)一步探索PD發(fā)病機(jī)制。本研究目的是探索漢族PD患者LRRK2基因罕見變異情況,并研究LRRK2基因G2385R和R1628P兩個常見多態(tài)位點與帕金森病發(fā)生之間潛在關(guān)聯(lián),探索LRRK2“基因型-表型”（genotype-phenotype）之間關(guān)聯(lián)現(xiàn)象。方法:1.連續(xù)收集296例中國漢族PD患者血液標(biāo)本,提取基因組DNA,對其進(jìn)行全外顯子測序及靶向測序,測序均包括LRRK2基因的51個外顯子及外顯子一內(nèi)含子交接區(qū)。將測序PD患者中LRRK2基因變異位點與643名年齡、性別匹配的健康對照組 in-house data 及 1000 G... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：128 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細(xì)胞中轉(zhuǎn)染ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ質(zhì)�？芍律窠�(jīng)毒性

中國漢族帕金森病患者基因變異分析及姜黃素對Ｚ７？／＾２Ｇ２３８５Ｒ變異的保護(hù)作用?第二部分??Ｖｅｃｔ?ＬＲＲＫ２?ＷＴ?ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ??Ｃｕｒ??ＰＭＨＳｉＢｉＨｉ?１５〇ｉ??Ｈ?ｓ?ｉｒ１ｌｉＩｉｎ?ｉＡ＊�。�！?．?＊＊＊＊＊＊￡?ｎ?１０??？■■Ｂ?卜?ｌｌ＿＿??ｖｅｃｔ?Ｇ２３８５Ｒ??圖４．１姜黃素對Ｇ２３８５Ｒ變異誘導(dǎo)神經(jīng)毒性的保護(hù)作用。??姜黃素（Ｃｕｒｃｕｍｉｎ）濃度為?０．１ｕＭ，０．５ｕＭ，?ｌ．ＯｕＭ?作用于?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ?細(xì)胞?ｌｈ，?ｌｈ??后轉(zhuǎn)染Ｖｅｃｔ、ＬＲＲＫ２ＷＴ、ＬＲＲＫ２Ｇ２３８５Ｒ質(zhì)粒，觀察細(xì)胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）生存率（計??數(shù)軸突長度大ｆ？胞體長度２倍的細(xì)胞）。隨著羞黃素濃度的堉加（０．１｜ａＭ、０．５ｐＭ、??１鄭Ｍ?），?２４小時后發(fā)現(xiàn)ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ轉(zhuǎn)染組細(xì)胞生存率呈濃度依賴性增加。ｎ＝３－４．??＊與未給藥Ｖｅｃｔ組相比，＃與未給藥Ｇ２３８５Ｒ組相比。Ｃｕｒ，姜黃素Ｃｕｒｃｕｍｉｎ；?＊，Ｐ＜０．０５；??Ｐ＜０．０１；?＊＊＊，＾＜０．００１；＾，?Ｐ＜０．０１〇??４．２?Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ對Ｇ２３８５Ｒ變異丨秀導(dǎo)神經(jīng)＃性無明呆護(hù)作用??經(jīng)過杳閱文獻(xiàn)，Ｍ樣在轉(zhuǎn)染前１２ｈ，史換為相應(yīng)濃度的含有Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ?（ＣＤＫ－５??抑制劑，濃度梯度設(shè)置為〇ＭＭ，０．５卜ｉＭ，ｌ｜ａＭ，?５＾Ｍ）的培養(yǎng)基孵育１２ｈ，１２ｈ只分別轉(zhuǎn)??染?Ｖｅｃｔ、ＬＲＲＫ２?ＷＴ、ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ?質(zhì)粒二組（按照?ＧＦＰ?與?ＬＲＲＫ２?質(zhì)粒比例?１：１５??進(jìn)行轉(zhuǎn)染），繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞４８ｈ。４８ｈ后Ｈ到置Ｖ微鏡卜觀察細(xì)胞形態(tài)。細(xì)胞生存牛

第二部分?中國漢族帕金森病患者基因變異分析及姜黃素對ＭＭ２?Ｇ２３８５Ｒ變異的保護(hù)作用??Ｖｅｃｔ?ＬＲＲＫ２?ＷＴ?ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ??－■■■Ｈ１８１ＩＩ?ＩＢ??Ｖｅｃｔ?ＬＲＲＫ２?ＷＴ?ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ??￥?■■■??圖４．２?Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ對［／？／？尺２?Ｇ２３８５Ｒ變異誘導(dǎo)神經(jīng)毒性無明顯保護(hù)作用。??Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ?（ＣＤＫ－５?抑制劑）濃度為?０．１｜ｉＭ，０．５（ｉＭ，１．０｜＿ｉＭ?作用于?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ?細(xì)??胞２４ｈ，２４ｈ后轉(zhuǎn)染Ｖｅｃｔ、ＬＲＲＫ２?ＷＴ、ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ三組的質(zhì)粒（同樣按照ＧＦＰ??與ＬＲＲＸ２質(zhì)粒１：１５的比例進(jìn)行轉(zhuǎn)染），觀察細(xì)胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）生存率（同樣計數(shù)軸??突長度大于胞體長度２倍的健康細(xì)胞）。在各種Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ濃度下（０．５ｆｉＭ、ｌｐＭ、??５ｐＭ?），均未發(fā)現(xiàn)Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ有對Ｇ２３８５Ｒ變異誘導(dǎo)神經(jīng)毒性的保護(hù)作用。??ｎ＝３－４．?Ｒｏｓ：?Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ．??４．３?Ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ?Ｄ不改變尺２?Ｇ２３８５Ｒ變異誘導(dǎo)神經(jīng)毒性作用??在ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細(xì)胞轉(zhuǎn)染前１２ｈ，更換培養(yǎng)基為相應(yīng)濃度的含有Ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ?Ｄ?（微管??穩(wěn)定劑，濃度梯度設(shè)置為０ｍＭ，１０｜＿ｉＭ，?２５｜ａＭ，５０｜ｉＭ）的Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培養(yǎng)基孵育１２ｈ，??１２ｈ后轉(zhuǎn)染在ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細(xì)胞中二組Ｖｅｃｔ、ＬＲＲＫ２ＷＴ、ＬＲＲＫ２Ｇ２３８５Ｒ質(zhì)粒，繼續(xù)??培養(yǎng)細(xì)胞４８ｈ。４８ｈ后于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。以同樣的方法計算細(xì)胞生存率。??我們的結(jié)果顯示，在所有濃度梯度下（１０ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ）


本文編號：3303294