發(fā)布時(shí)間：2021-07-22 09:53

　　CIM（Cytokinin Induced Message）基因?qū)儆趀xpansin-B2家族,目前關(guān)于CIM基因的研究集中在豆科植物的葉片發(fā)育方面。蒺藜苜蓿（Medicago truncatula）是一年生草本植物,具有生長(zhǎng)速度快,染色體組數(shù)量少（2n=16）,轉(zhuǎn)基因研究過程中轉(zhuǎn)化效率高等優(yōu)點(diǎn),是研究豆科植物遺傳學(xué)的模式植物。紫花苜蓿（Medicago sativa）因具有高蛋白含量,豐富的維生素和微量元素,產(chǎn)量高等優(yōu)點(diǎn),成為人工種植范圍最大的牧草之一。本研究旨在探究蒺藜苜蓿CIM基因在紫花苜蓿中表達(dá)是否對(duì)其葉片發(fā)育產(chǎn)生影響。試驗(yàn)以蒺藜苜蓿R108品種為材料,首先在蒺藜苜蓿中克隆出CIM基因,該基因編碼區(qū)長(zhǎng)度為828bp,編碼275個(gè)氨基酸。而后將該基因連于3302-3flag載體上,構(gòu)建植物表達(dá)載體。將構(gòu)建的植物表達(dá)載體以農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的方法導(dǎo)入紫花苜蓿葉片中,通過植物組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿植株,觀察轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的表型。結(jié)果表明轉(zhuǎn)入CIM基因的紫花苜蓿復(fù)葉葉片出現(xiàn)發(fā)育異常現(xiàn)象,與野生型紫花苜蓿相比,植株相對(duì)矮小,葉片呈現(xiàn)梨形,基部的分枝數(shù)量增加。同時(shí),本研究進(jìn)一步完善了紫花苜蓿組... 

【文章來源】：北京林業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

1大腸桿菌轉(zhuǎn)化

蒺藜苜蓿CIM基因克隆及初步鑒定223結(jié)果與分析3.1構(gòu)建植物表達(dá)載體結(jié)果3.1.1大腸桿菌轉(zhuǎn)化結(jié)果通過凝膠電泳鑒定結(jié)果如圖3.1.1,膠圖顯示條帶清晰，說明大腸桿菌中成功轉(zhuǎn)入CIM基因，可以進(jìn)行下一步試驗(yàn)。圖3.1.1大腸桿菌轉(zhuǎn)化Figure3.1.1E.coiltransformation3.1.2構(gòu)建植物表達(dá)載體結(jié)果通過凝膠電泳鑒定結(jié)果如圖3.1.2，膠圖顯示條帶清晰，除8號(hào)外，其余載體構(gòu)建成功。圖3.1.2構(gòu)建植物表達(dá)載體M12345M1234567891011121314

結(jié)果與分析23Figure3.1.2Constructionofplantexpressionvector3.1.3農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化結(jié)果通過凝膠電泳鑒定結(jié)果如圖3.1.3，膠圖顯示條帶清晰，說明農(nóng)桿菌中成功轉(zhuǎn)入CIM基因，可以進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化試驗(yàn)。圖3.1.3農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化Figure3.1.3Agrobacterium-mediatedtransformation3.2植物組織培養(yǎng)結(jié)果3.2.1紫花苜蓿的轉(zhuǎn)化和共培養(yǎng)用已經(jīng)經(jīng)過鑒定的農(nóng)桿菌菌液，浸泡已經(jīng)切割好的紫花苜蓿葉片，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法侵染紫花苜蓿葉片，轉(zhuǎn)化完成后用無菌濾紙吸干葉片上多余菌液，將葉片放置在SM4共培養(yǎng)基上進(jìn)行共培養(yǎng)，如圖3.2.1。圖3.2.1共培養(yǎng)階段Figure3.2.1Co-culturestageM1234567

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]施氮對(duì)不同水分條件下紫花苜蓿氮素吸收及根系固氮酶活性的影響[J]. 高麗敏,蘇晶,田倩,沈益新.  草業(yè)學(xué)報(bào). 2020(03)
[2]外源ABA對(duì)蘇打鹽堿脅迫的紫花苜蓿內(nèi)源激素含量的影響[J]. 李紅,李波,楊曌.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020(06)
[3]紫花苜蓿MsERF003的基因克隆及其在干旱脅迫中的功能分析[J]. 堅(jiān)偉寧,左朋,張國珍,范杰英,邢少辰,鄭梅竹,韋正乙.  分子植物育種. 2020(17)
[4]轉(zhuǎn)OvBAN/bar雙價(jià)基因的紫花苜蓿對(duì)蟲蝕及除草劑的耐受性分析[J]. 董文科,陳春艷,馬暉玲.  草業(yè)學(xué)報(bào). 2019(07)
[5]AtSOS基因在紫花苜蓿中的表達(dá)及其耐鹽性研究[J]. 麻冬梅,秦楚.  草業(yè)學(xué)報(bào). 2018(06)
[6]堿脅迫應(yīng)答基因GsARHP的克隆及轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的耐堿性分析[J]. 陳冉冉,朱娉慧,賈博為,宋雪薇,王子君,李佶娜,李強(qiáng),丁曉東,朱延明.  草業(yè)學(xué)報(bào). 2017(09)
[7]豆科復(fù)葉發(fā)育分子遺傳機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 楊霞,高金珊,楊素欣.  植物生理學(xué)報(bào). 2017(06)
[8]白樺擴(kuò)展蛋白基因的克隆分析及植物表達(dá)載體構(gòu)建[J]. 王子劍,孫丹,于穎,張巖,王超.  西南林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(01)
[9]抗旱性不同的小麥擴(kuò)展蛋白活性及基因表達(dá)分析[J]. 趙美榮,李永春,劉輝,秦海強(qiáng).  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(01)
[10]紫花苜蓿轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展[J]. 何平,韋正乙,孫卉,邢少辰.  草業(yè)科學(xué). 2013(04)

碩士論文
[1]UFO基因?qū)ψ匣ㄜ俎５霓D(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因鑒定[D]. 李思峰.北京林業(yè)大學(xué) 2019
[2]紫花苜蓿MsTHI1基因克隆及抗旱功能分析[D]. 尹航.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[3]紫花苜蓿防御基因MsDefl轉(zhuǎn)化甘蔗及抗病轉(zhuǎn)基因植株的篩選[D]. 沈林波.海南大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3296930