橢圓食粉螨Aleuroglyphus ovatus（Troupeau）隸屬于蜱螨亞綱Aacari、粉螨科Acaridae,是一種世界性的儲糧害螨,且危害人體健康。重金屬污染日益嚴重,對生物的健康及生存繁殖產(chǎn)生了嚴重危害。橢圓食粉螨抗氧化基因超氧化物歧化酶SOD對于Pb2+脅迫的響應機制尚不明確。本文克隆了橢圓食粉螨三個SOD基因cDNA全長,并且研究了不同濃度Pb2+脅迫下各發(fā)育階段橢圓食粉螨總SOD酶活及mRNA表達變化規(guī)律,主要結(jié)果如下:1、橢圓食粉螨SOD酶活在不同發(fā)育階段及不同濃度Pb2+脅迫下的響應測定5個不同濃度（0、12.5、25、50和100mg/kg,其中0mg/kg為對照組）Pb2+脅迫下橢圓食粉螨卵、幼螨、第一若螨、第三若螨和成螨的總SOD酶活。研究發(fā)現(xiàn),0-100 mg/kg Pb2+處理下,橢圓食粉螨體內(nèi)SOD酶活隨著發(fā)育歷期,呈先升后降的趨勢,卵期酶活最低,第一若螨最高。隨著Pb2+濃度升高,各發(fā)育階段橢圓食粉螨SOD酶活呈先升后降趨勢,但均顯著高于對照組,其中,在25 mg/kg Pb2+濃度下各螨態(tài)SOD酶活顯著高于其他處理組。此后SOD酶活隨濃度升高而... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１不同濃度Ｐｂ２＋脅迫對不同發(fā)育階段橢圓食粉蝸ＳＯＤ酶活（Ｕ／ｍｇｐｒｏｔ）的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ａｃｔｉｖｉｔｙ?（Ｕ／ｍｇｐｒｏｔ）?ｏｆ?ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ?ｄｉｓｍｕｔａｓｅ?（ＳＯＤ）?ｅｎｚｙｍｅ?ｆｒｏｍ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｓｔａｇｅｓ?ｏｆ?Ａ．?ｏｖａｔｕｓ?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｔ?

?第３章橢圓食粉螨超氧化物歧化酶基因的克隆及分析???３．２結(jié)果與分析??３．２．１橢圓食粉螨基因全長的克隆??３．２．１．１橢圓食粉蟥總ＲＮＡ提取質(zhì)？??將提取得到的橢圓食粉螨總ＲＮＡ立即用１％瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，結(jié)??果如圖３．１所示，有三條亮帶，其中２８Ｓ和１８Ｓ明亮且單一，還有一條較淺的??５．８?Ｓ，表明提取的橢圓食粉螨總ＲＮＡ質(zhì)量較好，較為完整。測得橢圓食粉螨總??ＲＮＡＡ２６〇／Ａ２８ｑ值的范圍為１．９８＜Ａ２６ｇ／Ａ２８〇＜２．１，表明所抽提橢圓食粉螨ＲＮＡ純度??較好。??圖３．１橢圓食粉螨總ＲＮＡ瓊脂糖凝膠電泳圖??Ｆｉｇｕｒｅ?３．１?Ｔｈｅ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｆｏｒ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｏｆ?Ａ．?ｏｖａｔｕｓ??３．２．１．２也ｃＤＮＡ序列的全長克隆??以橢圓食粉螨５’／３’ＲＡＣＥ?ｃＤＮＡ為模板，根據(jù)橢圓食粉螨轉(zhuǎn)錄組測序所獲??的三個ＳＯＤ核苷酸序列片段設計特異性引物，ＰＣＲ擴增（為巢式ＰＣＲ），電泳??檢測，出現(xiàn)單一明亮目的條帶后割膠純化，連接轉(zhuǎn)化并篩選陽性克隆進行測序，??分別獲得的５’末端和３’末端，長度均小于３００ｂｐ，??如圖３．２為電泳結(jié)果。查看測序結(jié)果峰圖，并比對核苷酸序列，翻譯無誤確認擴??增產(chǎn)物為目的基因后，將三個ＳＯＤ?ｃＤＮＡ末端核苷酸序列分別與對應的中間序??列進行拼接所得即為橢圓食粉螨三個ＳＯＤ基因ｃＤＮＡ全長序列。??２１??

?第３章橢圓食粉螨超氧化物歧化酶基因的克隆及分析???圖３．２．橢圓食粉螨Ａ？Ｓ０Ｄ７，?ｄｃ＾ＯＤ３的５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ?ＰＣＲ產(chǎn)物電泳圖??（左邊為５’ＲＡＣＥＰＣＲ產(chǎn)物電泳圖，右邊為３’，ｌＯＯＯｂｐ?Ｍａｒｋｅｒ）??Ｆｉｇｕｒｅ?３．２．?Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｆｏｒ?５！ＲＡＣＥ?ａｎｄ?３＊ＲＡＣＥ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＡｏＳＯＤｌ，ＡｏＳＯＤ２，?ａｎｄ??ＡｏＳＯＤ３?ｉｎ?Ａｌｅｕｒｏｇｌｙｐｈｕｓ?ｏｖａｔｕｓ?（Ｔｈｅ?ｌｅｆｔ?ｉｓ?ｆｏｒ?５５?ＲＡＣＥ?ＰＣＲ，?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｒｉｇｈｔ?ｉｓ?３９?ＲＡＣＥ，?ｗｉｔｈ??ｌＯＯＯｂｐ?Ｍａｒｋｅｒ．）??３．２．２橢圓食粉螨如義泌基因全長的生物信息學分析??３．２．２．１?ｃＤＮＡ序列全長特征??基因ｃＤＮＡ序列全長為ｌｌＯＯｂｐ，?ＯＲＦ為５４６ｂｐ，編碼１８１個ａａ，??５’?ＵＴＲ為２９１?ｂｐ，?３’?ＵＴＲ為２６３?ｂｐ。推導如切以蛋白質(zhì)分子式為??Ｃ８２３Ｈ１３２２Ｎ２５４Ｏ２５２Ｓ６，分子質(zhì)量約為?１８．９９９ｋＤａ，理論等電點?ｐｉ?為?９．１０。??ＭＯＤ７氨基酸系列包含兩個簽名基序：１６５－１７６（ＧＮＡＧＧＲＶＧＣＧＩＩ），７卜??８１（ＧＦＨＩＨＱＹＧＤＴＲ）。Ｃｕ２＋結(jié)合位點為?Ｈｉｓ７３，Ｈｉｓ７５，Ｈｉｓ％，Ｈｉｓｌ４７。Ｚｎ２＋結(jié)合??位點?Ｈｉｓ９０，Ｈｉｓ９８，?Ｈｉｓｌ０７，ＡｓｐｌｌＯ?（見圖?３．３）。??３．２．２．２?ｃＤＮＡ序列全長特征??ＪｏＳＯＤ２基因ｃＤＮＡ序列全長為１０４２ｂｐ，ＯＲＦ為６９３ｂｐ，編碼２３０個ａａ，??５，ＵＴＲ為

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]橢圓食粉螨卵黃原蛋白基因?qū)χ亟饘巽U脅迫的響應機制[D]. 奚劍飛.南昌大學 2019
[2]朱砂葉螨超氧化物歧化酶基因的克隆與表達分析[D]. 李曉月.南昌大學 2018
[3]重金屬鉛脅迫下橢圓食粉螨實驗種群生態(tài)學研究[D]. 閔強.南昌大學 2017
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[5]汞和鎘對紫貽貝（Mytilus edulis）的單一與聯(lián)合作用效應[D]. 潘京津.中國海洋大學 2015



本文編號：3294731