橢圓食粉螨Aleuroglyphus ovatus（Troupeau）隸屬于蜱螨亞綱Aacari、粉螨科Acaridae,是一種世界性的儲(chǔ)糧害螨,且危害人體健康。重金屬污染日益嚴(yán)重,對(duì)生物的健康及生存繁殖產(chǎn)生了嚴(yán)重危害。橢圓食粉螨抗氧化基因超氧化物歧化酶SOD對(duì)于Pb2+脅迫的響應(yīng)機(jī)制尚不明確。本文克隆了橢圓食粉螨三個(gè)SOD基因cDNA全長(zhǎng),并且研究了不同濃度Pb2+脅迫下各發(fā)育階段橢圓食粉螨總SOD酶活及mRNA表達(dá)變化規(guī)律,主要結(jié)果如下:1、橢圓食粉螨SOD酶活在不同發(fā)育階段及不同濃度Pb2+脅迫下的響應(yīng)測(cè)定5個(gè)不同濃度（0、12.5、25、50和100mg/kg,其中0mg/kg為對(duì)照組）Pb2+脅迫下橢圓食粉螨卵、幼螨、第一若螨、第三若螨和成螨的總SOD酶活。研究發(fā)現(xiàn),0-100 mg/kg Pb2+處理下,橢圓食粉螨體內(nèi)SOD酶活隨著發(fā)育歷期,呈先升后降的趨勢(shì),卵期酶活最低,第一若螨最高。隨著Pb2+濃度升高,各發(fā)育階段橢圓食粉螨SOD酶活呈先升后降趨勢(shì),但均顯著高于對(duì)照組,其中,在25 mg/kg Pb2+濃度下各螨態(tài)SOD酶活顯著高于其他處理組。此后SOD酶活隨濃度升高而... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖２．１不同濃度Ｐｂ２＋脅迫對(duì)不同發(fā)育階段橢圓食粉蝸ＳＯＤ酶活（Ｕ／ｍｇｐｒｏｔ）的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ａｃｔｉｖｉｔｙ?（Ｕ／ｍｇｐｒｏｔ）?ｏｆ?ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ?ｄｉｓｍｕｔａｓｅ?（ＳＯＤ）?ｅｎｚｙｍｅ?ｆｒｏｍ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｓｔａｇｅｓ?ｏｆ?Ａ．?ｏｖａｔｕｓ?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｔ?

?第３章橢圓食粉螨超氧化物歧化酶基因的克隆及分析???３．２結(jié)果與分析??３．２．１橢圓食粉螨基因全長(zhǎng)的克隆??３．２．１．１橢圓食粉蟥總ＲＮＡ提取質(zhì)？??將提取得到的橢圓食粉螨總ＲＮＡ立即用１％瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)，結(jié)??果如圖３．１所示，有三條亮帶，其中２８Ｓ和１８Ｓ明亮且單一，還有一條較淺的??５．８?Ｓ，表明提取的橢圓食粉螨總ＲＮＡ質(zhì)量較好，較為完整。測(cè)得橢圓食粉螨總??ＲＮＡＡ２６〇／Ａ２８ｑ值的范圍為１．９８＜Ａ２６ｇ／Ａ２８〇＜２．１，表明所抽提橢圓食粉螨ＲＮＡ純度??較好。??圖３．１橢圓食粉螨總ＲＮＡ瓊脂糖凝膠電泳圖??Ｆｉｇｕｒｅ?３．１?Ｔｈｅ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｆｏｒ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｏｆ?Ａ．?ｏｖａｔｕｓ??３．２．１．２也ｃＤＮＡ序列的全長(zhǎng)克隆??以橢圓食粉螨５’／３’ＲＡＣＥ?ｃＤＮＡ為模板，根據(jù)橢圓食粉螨轉(zhuǎn)錄組測(cè)序所獲??的三個(gè)ＳＯＤ核苷酸序列片段設(shè)計(jì)特異性引物，ＰＣＲ擴(kuò)增（為巢式ＰＣＲ），電泳??檢測(cè)，出現(xiàn)單一明亮目的條帶后割膠純化，連接轉(zhuǎn)化并篩選陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序，??分別獲得的５’末端和３’末端，長(zhǎng)度均小于３００ｂｐ，??如圖３．２為電泳結(jié)果。查看測(cè)序結(jié)果峰圖，并比對(duì)核苷酸序列，翻譯無(wú)誤確認(rèn)擴(kuò)??增產(chǎn)物為目的基因后，將三個(gè)ＳＯＤ?ｃＤＮＡ末端核苷酸序列分別與對(duì)應(yīng)的中間序??列進(jìn)行拼接所得即為橢圓食粉螨三個(gè)ＳＯＤ基因ｃＤＮＡ全長(zhǎng)序列。??２１??

?第３章橢圓食粉螨超氧化物歧化酶基因的克隆及分析???圖３．２．橢圓食粉螨Ａ？Ｓ０Ｄ７，?ｄｃ＾ＯＤ３的５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ?ＰＣＲ產(chǎn)物電泳圖??（左邊為５’ＲＡＣＥＰＣＲ產(chǎn)物電泳圖，右邊為３’，ｌＯＯＯｂｐ?Ｍａｒｋｅｒ）??Ｆｉｇｕｒｅ?３．２．?Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｆｏｒ?５�。遥粒茫�?ａｎｄ?３＊ＲＡＣＥ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＡｏＳＯＤｌ，ＡｏＳＯＤ２，?ａｎｄ??ＡｏＳＯＤ３?ｉｎ?Ａｌｅｕｒｏｇｌｙｐｈｕｓ?ｏｖａｔｕｓ?（Ｔｈｅ?ｌｅｆｔ?ｉｓ?ｆｏｒ?５５?ＲＡＣＥ?ＰＣＲ，?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｒｉｇｈｔ?ｉｓ?３９?ＲＡＣＥ，?ｗｉｔｈ??ｌＯＯＯｂｐ?Ｍａｒｋｅｒ．）??３．２．２橢圓食粉螨如義泌基因全長(zhǎng)的生物信息學(xué)分析??３．２．２．１?ｃＤＮＡ序列全長(zhǎng)特征??基因ｃＤＮＡ序列全長(zhǎng)為ｌｌＯＯｂｐ，?ＯＲＦ為５４６ｂｐ，編碼１８１個(gè)ａａ，??５’?ＵＴＲ為２９１?ｂｐ，?３’?ＵＴＲ為２６３?ｂｐ。推導(dǎo)如切以蛋白質(zhì)分子式為??Ｃ８２３Ｈ１３２２Ｎ２５４Ｏ２５２Ｓ６，分子質(zhì)量約為?１８．９９９ｋＤａ，理論等電點(diǎn)?ｐｉ?為?９．１０。??ＭＯＤ７氨基酸系列包含兩個(gè)簽名基序：１６５－１７６（ＧＮＡＧＧＲＶＧＣＧＩＩ），７卜??８１（ＧＦＨＩＨＱＹＧＤＴＲ）。Ｃｕ２＋結(jié)合位點(diǎn)為?Ｈｉｓ７３，Ｈｉｓ７５，Ｈｉｓ％，Ｈｉｓｌ４７。Ｚｎ２＋結(jié)合??位點(diǎn)?Ｈｉｓ９０，Ｈｉｓ９８，?Ｈｉｓｌ０７，ＡｓｐｌｌＯ?（見(jiàn)圖?３．３）。??３．２．２．２?ｃＤＮＡ序列全長(zhǎng)特征??ＪｏＳＯＤ２基因ｃＤＮＡ序列全長(zhǎng)為１０４２ｂｐ，ＯＲＦ為６９３ｂｐ，編碼２３０個(gè)ａａ，??５，ＵＴＲ為

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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