甘薯是世界重要的七大糧食作物之一,由于具有生產(chǎn)成本低,生物產(chǎn)量大,且可利用價值高等優(yōu)點在很多地區(qū)被廣泛推廣。甘薯多生長于貧瘠土地中,環(huán)境對其生物產(chǎn)量的影響至關(guān)重要,因此對甘薯相關(guān)抗逆基因結(jié)構(gòu)和功能的研究具有重要意義。海藻糖作為一種植物滲透調(diào)節(jié)物質(zhì),當植物受到干旱、高鹽、高溫等非生物脅迫時,可取代水分子與生物膜及蛋白質(zhì)等生物大分子的羥基,維持植物細胞膜結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定,從而提高植物抗逆性。海藻糖-6-磷酸合成酶（trehalose-6-phosphate synthase,TPS）是植物海藻糖唯一合成途徑中的關(guān)鍵酶,具有無法替代的作用。許多研究表明TPS可參與植物逆境應答反應,提高植物抗性。本研究通過干旱條件下從甘薯轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中得到一條與擬南芥AtTPS1高度同源的Unigene序列,設(shè)計特異性引物,成功克隆得到IbTPS1基因,對其序列特征、表達模式進行分析后將IbTPS1序列N-端2-88氨基酸進行截斷修飾,構(gòu)建酵母表達載體進行TPS活性鑒定和酵母抗性鑒定,構(gòu)建植物表達載體進行亞細胞定位和轉(zhuǎn)基因甘薯抗性鑒定,并對作用機理進行了研究。具體結(jié)果如下所示:（1）采用RT-PCR技術(shù)成功從... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學山西省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同物種TPS分類[46]

-14-增，得到2811bp的電泳條帶（圖2-1），與克隆載體連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞，LB（CAR+）固體平板上37℃培養(yǎng)過夜后，挑取白色單菌落于LB（CAR+）固體平板37℃培養(yǎng)8h，挑取單菌落進行PCR鑒定，結(jié)果如圖2-2所示IbTPS1菌液PCR鑒定1-5泳道均得到2811bp目的條帶，提取質(zhì)粒并測序鑒定。圖2-1IbTPS1全長cDNA的PCR擴增Figure2-1FulllengthcDNAofIbTPS1注：M:10000DNAMarker；1-3IbTPS1全長cDNA的PCR擴增電泳條帶Note:M:10000DNAMarker;1-3ElectrophoresisbandsofIbTPS1PCRamplification圖2-2IbTPS1菌液PCR鑒定Figure2-2FulllengthcDNAofIbTPS1注：M:10000DNAMarker；1-5IbTPS1菌液PCR鑒定電泳條帶Note:M:10000DNAMarker;1-5ElectrophoresisbandsofIbTPS1PCRidentification2.3.2IbTPS1序列生物信息學分析2.3.2.1IbTPS1編碼氨基酸一級結(jié)構(gòu)預測ExPASy-ProtScale軟件預測IbTPS1編碼蛋白的分子式C4727H7416N1344O1413S31，理論

IbTPS1菌液PCR鑒定

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]玉米海藻糖-6-磷酸合成酶基因家族的功能驗證和差異表達分析[D]. 蔣偉.四川農(nóng)業(yè)大學 2010

碩士論文
[1]墊狀卷柏海藻糖-6-磷酸合成酶基因（SpTPS1）的截短修飾[D]. 趙生美.四川農(nóng)業(yè)大學 2012
[2]海藻糖改善枯草芽孢桿菌電轉(zhuǎn)化方法的研究[D]. 張曉慧.南京農(nóng)業(yè)大學 2010
[3]墊狀卷柏海藻糖-6-磷酸合成酶基因（SpTPS1）的克隆及其功能分析[D]. 林荊.四川農(nóng)業(yè)大學 2009
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本文編號：3288223