桃果實收獲于高溫高濕季節(jié),在采后很容易受病原菌侵染而發(fā)生腐爛,造成大量的損失,其中,由鏈核盤菌（Monilinia fracticola）引起的褐腐病是最嚴(yán)重的病害之一,低溫雖然能抑制此病害的擴(kuò)展,但是低溫往往會帶來嚴(yán)重的冷害問題。前期研究發(fā)現(xiàn),一氧化氮（NO）可誘導(dǎo)桃果實提高抗病性,但其誘導(dǎo)抗病的機(jī)理還不清楚。近年來發(fā)現(xiàn),蛋白亞硝基化作用是生物體完成NO信號傳導(dǎo)的主要形式。亞硝基谷胱甘肽還原酶（GSNOR）通過對亞硝基谷胱甘肽（GSNO）的降解參與NO的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),并通過調(diào)控亞硝基硫醇（SNOs）和蛋白質(zhì)的亞硝基化作用參與植物的防衛(wèi)反應(yīng)。但是,目前GSNOR在桃果實抗病性中的作用尚不清楚。因此,在本研究中,以中華壽桃為實驗材料,用GSNOR抑制劑（N6022）和NO對采后桃果實進(jìn)行處理,探究它們對桃果實褐腐病的影響及作用機(jī)理。通過基因瞬時沉默GSNOR后進(jìn)行亞硝基化修飾組學(xué)分析探究GSNOR在抗病過程中的分子機(jī)制。具體結(jié)果如下:（1）60μM N6022和15μM NO溶液處理顯著降低了桃果實的發(fā)病率和病斑直徑,提高了谷胱甘肽還原酶（GR）的活性和GR的基因表達(dá),抑制了GSNOR的活性... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

在23℃貯藏期間GSNOR抑制劑（N6022）和NO處理對桃果實病害發(fā)展的影響

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文273.1.2GSNOR抑制劑和NO對桃果實GR和GSNOR活性及基因表達(dá)的影響圖2在23℃貯藏期間GSNOR抑制劑（N6022）和NO處理對桃果實GR（A）和GSNOR（B）活性以及GR（C）和GSNOR（D）基因表達(dá)的影響Fig.2EffectofGSNORinhibitor(N6022)andNOtreatmentontheactivityofGR(A)andGSNOR(B)andthegeneexpressionofGR(C)andGSNOR(D)inpeachfruitduringstorageat23°C桃果實接種褐腐菌后，GR活性呈下降趨勢，與對照相比，NO和GSNOR抑制劑顯著抑制了GR活性的下降（圖2A）。GSNOR的活性在6h時顯著升高，NO和GSNOR抑制劑均抑制了GSNOR的活性，并且GSNOR抑制劑的抑制作用比NO的抑制作用強(qiáng)（圖2B）。通過測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)GR和GSNOR的基因表達(dá)水平在0-12h時變化明顯，在之后變化不顯著，所以圖中只顯示了0-12h的基因表達(dá)情況。從圖中可以看出，GR的基因表達(dá)水平總體呈現(xiàn)下降趨勢，NO和GSNOR抑制劑處理的桃果實中GR的表達(dá)水平明顯高于對照（圖2C）。NO和GSNOR抑制劑處理的桃果實中GSNOR的基因表達(dá)水平在6h內(nèi)顯著低于對照，GSNOR抑制劑對GSNOR的表達(dá)具有最明顯的抑制作用，但在12h時各處理組的GSNOR表達(dá)水平?jīng)]有顯著性差異（圖2D）。

GSNOR抑制劑處理和GSNOR基因瞬時沉默對桃果實抗褐腐病的影響283.1.3NO處理后桃果實GSNOR的S-亞硝基化位點(diǎn)測定圖3通過位點(diǎn)特異性蛋白質(zhì)組學(xué)將GSNOR的Cys-85鑒定為S-亞硝基化殘基（A）并在Uniprot中預(yù)測了桃GSNOR蛋白的3D結(jié)構(gòu)模型（B）Fig.3Cys-85ofGSNORwasidentifiedasanS-nitrosylatedresiduebysite-specificproteomicmassspectrometry(A)and3DstructuremodelofGSNORproteinofpeachwaspredictedinUniprot(B)將經(jīng)過NO處理后6h和12h的桃果實樣品和對照的桃果實樣品進(jìn)行亞硝基化修飾iodo-TMT標(biāo)記定量組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)GSNOR蛋白的第85位的半胱氨酸的巰基被鑒定為S-亞硝基化殘基。亞硝基化的肽段序列為KILYTALCHTDAYTWGGKD（圖3A）。通過UniProt預(yù)測了GSNOR的蛋白模型，圖中放大結(jié)構(gòu)即是第85位半胱氨酸的結(jié)構(gòu)（圖3B）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]陸地棉漆酶基因家族鑒定及在黃萎病菌脅迫下的表達(dá)分析[J]. 趙晶,李旭彤,梁學(xué)忠,王志城,崔靜,陳斌,吳立強(qiáng),王省芬,張桂寅,馬峙英,張艷.  作物學(xué)報. 2019(12)
[2]玉米雄穗長的全基因組關(guān)聯(lián)分析[J]. 潘順祥,趙美愛,裴玉賀,郭新梅,宋希云.  華北農(nóng)學(xué)報. 2017(05)
[3]植物抗病機(jī)制及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究進(jìn)展[J]. 丁麗娜,楊國興.  生物技術(shù)通報. 2016(10)
[4]一氧化氮處理對甜瓜果實采后病害的控制及活性氧代謝的作用[J]. 敬媛媛,吳斌,李艷嬌,楊彩虹,朱璇.  現(xiàn)代食品科技. 2016(12)
[5]植物抗病機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 楊銀,高志勇.  科教導(dǎo)刊(中旬刊). 2016(09)
[6]番茄漆酶基因LeLACmiR397的克隆與表達(dá)分析[J]. 趙先炎,龐明利,趙強(qiáng),任怡然,郝玉金,由春香.  園藝學(xué)報. 2015(07)
[7]植物代謝產(chǎn)物在抗病反應(yīng)中的功能研究進(jìn)展[J]. 覃瀚儀,李魏,戴良英.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2015(18)
[8]蛋白質(zhì)巰基亞硝基化分子機(jī)制及其疾病相關(guān)性[J]. 石婷,陳銘,陳雄平,汪汲濤,萬錒俊,趙一雷.  化學(xué)進(jìn)展. 2015(05)
[9]蛋白質(zhì)翻譯后修飾及其生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J]. 孫琪,張輝,馬語曼,張鑫,唐子人,王雯.  中華老年心腦血管病雜志. 2014(09)
[10]植物抗病性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究[J]. 張紅軍.  吉林農(nóng)業(yè). 2013(11)

博士論文
[1]中國桃褐腐病菌及其抗藥性相關(guān)研究[D]. 胡勐郡.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013

碩士論文
[1]煙草屬亞硝基谷胱甘肽還原酶在調(diào)控細(xì)胞死亡中作用的研究[D]. 初叢.浙江師范大學(xué) 2015
[2]ATHK1對PEG誘導(dǎo)的擬南芥抗氧化系統(tǒng)的影響研究[D]. 劉慧.揚(yáng)州大學(xué) 2012



本文編號：3284507