目的:探究基質(zhì)金屬蛋白酶-10（matrix metalloproteinase-10,MMP-10）基因多態(tài)性位點rs17435959（C>G）和基質(zhì)金屬蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）基因多態(tài)性位點rs2252070（G>A）與慢性阻塞性肺疾�。╟hronic obstructive pulmonary disease,COPD）的相關(guān)性,為篩選COPD易感候選基因提供依據(jù)。方法:應(yīng)用堿基猝滅探針技術(shù)對性別、年齡和吸煙狀況匹配的305例COPD病例和326例健康對照進行基因分型,分別檢測多態(tài)性位點rs17435959和rs2252070在COPD患者和健康對照中的等位基因、基因型、單倍型頻率的分布情況。結(jié)果:MMP-10等位基因分布在兩組中無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.66,OR=0.90）,CG+GG基因型頻率在兩組中無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.74,OR=1.08）,在輕度至中度COPD、重度至極重度COPD和健康對照之間無統(tǒng)計學(xué)差異（等位基因P=0.89,顯性模型基因型P=0.83）;MMP-13等位基因分布在兩組中無統(tǒng)計學(xué)差... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

注：a示人染色體11q22.3位置基質(zhì)金屬蛋白酶基因位點，共包含9個MMPs亞型，目前已有研究提示該區(qū)域MMP-1、MMP-3、MMP-12蛋白酶及其基因多態(tài)性與COPD易感性相關(guān)，箭頭指示轉(zhuǎn)錄方向；

圖 4），由于一個堿基的錯配可導(dǎo)致其比完全配對的情況下在相對較低的溫度下解鏈，即提前出現(xiàn)熔解谷，不同的探針及實驗條件該溫度差異波動在 5-7℃左右，而同一探針及位點，相同的反應(yīng)體系下該溫度的差異是穩(wěn)定不變的。因此在熔解曲線上，單一的谷則提示為純合子，兩個不同溫度出現(xiàn)的谷則提示雜合子，而相對應(yīng)的基因型取決于探針的具體設(shè)計。該方法雖然具有簡單、經(jīng)濟、可靠、污染少、快速檢測等優(yōu)點，但難點在于探針的建立。穩(wěn)定可靠的探針建立需要注意以下問題：1）G 堿基自身對熒光有較強猝滅作用，F(xiàn)AM 熒光基團避免直接標記在 G 堿基；2）引物的解鏈溫度（melting temperature，TM）值盡量偏高，接近 60℃，而探針的 TM 值則需低于引物的 TM 值，鑒于 LightCycler（version 480II，Roche）PCR 儀的熔解曲線溫度一般為 40-70℃，且較低溫度下容易形成錯配，故探針的 TM 值往往在 55℃附近；3）實驗中對雜合子的檢測能力是探針建立的成功與否的最可靠評價標準。

圖 3 rs17435959 多態(tài)性位點基因型熔解曲線圖Fig3. The melting curve of rs17435959 for genotyping：MMP-10 多態(tài)性位點 rs17435959 G>C 為 CC 基因型時則對應(yīng)較高溫度時的熔解，TM 值約為 57.9℃，而 GG 基因型則由于一個堿基的錯配導(dǎo)致解鏈溫度降低，溶


本文編號：3283610