小檗堿橋酶（berberine bridge enzyme,BBE）家族,是一類典型的黃素雙共價(jià)氧化酶超家族（SCOPe d.58.32）的亞家族。我們的前期研究在發(fā)育木質(zhì)部糖蛋白組學(xué)中識(shí)別出了多個(gè)楊樹BBE基因,但其參與的生物學(xué)功能尚不清楚。我們識(shí)別出了毛果楊BBE家族所有成員,利用生物信息學(xué)手段分析了毛果楊BBE家族成員的信息,重點(diǎn)解析了PtBBE9a和PtBBE18a的表達(dá)特征,對(duì)其過表達(dá)功能進(jìn)行了鑒定。本研究主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:識(shí)別出了 69個(gè)毛果楊BBE家族成員,對(duì)其進(jìn)行分類,共分為A-F六類。大多數(shù)PtBBEs位于1號(hào)染色體和11號(hào)染色體上,顯示毛果楊BBE家族擴(kuò)張歸功于染色體間的復(fù)制,染色體內(nèi)復(fù)制以及基因串聯(lián)復(fù)制。根據(jù)phytozome電子數(shù)據(jù)和運(yùn)用RT-PCR手段,分析了毛果楊BBE基因家族的組織表達(dá)特征,PtBBE23a、PtBBE24a主要在木質(zhì)部高豐度表達(dá),PtBBE6b各個(gè)組織均有表達(dá)。篩選了一些可能參與莖發(fā)育和木質(zhì)素生物合成相關(guān)的BBE成員,PtBBE9a基因在木質(zhì)部高豐度表達(dá),并隨莖節(jié)數(shù)增加其表達(dá)量逐漸升高;PtBBE18a基因在木質(zhì)部高豐度表達(dá),其表達(dá)量也隨... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２ＢＢＥ分子結(jié)構(gòu)特征［１４］??－１４

?１緒論???Ａ?＿?一－?＾?Ｂ?Ｑ４２８一?Ｅ４ｉ！??而？＞?、嘗二??＾＾Ｙ１９３?＼??Ｃ?Ｅ４３Ｑ＞?＾一?Ｄ?Ｑ４３２?上一??Ｙ４７２?Ｎ４２８?Ｙ４７４??ｓ－ｒ－?－?Ｍ９＞??注：（Ａ）?Ｉ類活性位點(diǎn)：（Ｂ）?ＩＩ類活性位點(diǎn)；（Ｃ）?ＩＶ類活性位點(diǎn)；（Ｄ）?ＩＩＩ類活性位點(diǎn)。??圖１－３ＢＢＥ活性位點(diǎn)及分類【９】??Ｆｉｇ．?１－３?Ａｃｔｉｖｅ?ｓｉｔｅ?ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ＢＢＥ－ｌｉｋｅ?ｅｎｚｙｍｅｓ［９］??１．３．３?ＦＡＤ輔因子與氧化還原反應(yīng)??ＦＡＤ通過６－Ｓ－半胱氨酸，而－Ｎ卜組氨酸與蛋白質(zhì)的雙共價(jià)連接可能是ＢＢＥ－ＬＩＫＥ蛋??白質(zhì)家族最顯著的特性，這在任何其他黃素蛋白家族中都未報(bào)道過％但由于雙共??價(jià)連接不是正確折疊的先決條件，所以在有些成員并中不存在雙共價(jià)Ｍｍ。二價(jià)黃素??鍵能調(diào)節(jié)氧化還原電位，促進(jìn)輔因子和底物結(jié)合，增加結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性［１４，〃７８］。經(jīng)典的ＢＢＥ??氧化酶通過還原的ＦＡＤ被分子氧快速再氧化，伴隨著過氧化氫的形成和釋放與??各種ＢＢＥ－ＬＩＫＥ成員接收的有機(jī)分子的性質(zhì)和大小無關(guān)，相應(yīng)底物的氧化會(huì)導(dǎo)致ＦＡＤ??輔因子的減少。為了再生輔因子以進(jìn)行下一輪酶促轉(zhuǎn)換，需要將其再氧化［７８，７９］。??特定的氧結(jié)合口袋被確定在底物結(jié)合區(qū)域相對(duì)的黃素輔因子一側(cè)［Ｋ８Ｇ］。由于還原－??氧化過程的催化包括兩個(gè)半反應(yīng)，即還原和氧化，因此這對(duì)氧化還原反應(yīng)是非常重要??的。在ＢＢＥ－ＬＩＫＥ酶的催化下，蛋白質(zhì)底物和異咯嗪環(huán)的相互作用建立在ｒｅ側(cè)的，因??此在氧化半反應(yīng)的過程中激活氧的過程都被這些氨基酸編排。另一方面，■？＿側(cè)異惡嗪環(huán)??上的氨基酸的參與底

?３結(jié)果與分析???進(jìn)行半定量ＰＣＲ分析。與表達(dá)熱圖差異明顯的基因采取了另外一至兩對(duì)引物進(jìn)行確??認(rèn)。此外，由于有些序列相似性高，半定量引物無法將其區(qū)分，一些基因被作為一個(gè)??團(tuán)隊(duì)（ｔｅａｍ）?—起檢測(cè)，圖３－３?（ｂ）。凡８５幻６成熟的葉中高峰度表達(dá)。尸在??各個(gè)組織均有表達(dá)，在幼葉中表達(dá)量最高。辦在各個(gè)組織均有少量表達(dá)。??Ｐ沒在成熟葉片，韌皮部及木質(zhì)部均有表達(dá)，幼葉中幾乎無表達(dá)。乃５５￡７如和??巧５５五你在木質(zhì)部表達(dá)量高。在木質(zhì)部特異表達(dá)。付在葉片中表達(dá)量??高，在木質(zhì)部也少量表達(dá)。八５５￡／７６在幼葉中表達(dá)。和乃ＳＳ五％在老葉中表??達(dá)。乃５５五２如在各個(gè)組織中均有表達(dá)，幼葉中表達(dá)量略高。巧５５以２么??在初皮部少量表達(dá)。其余基因在這四個(gè)組織中表達(dá)量低。??（ｂ）幼葉老葉韌皮部木質(zhì)部??Ｃ＾Ｅ９ＢＳ＾＾３；：＾ｃｔ／ｎ２?２７ｃ??ｆＪｔ．ＨＨｈ；１４ｄ?３５ｃ??一３．?０?０．?０?３．?０?服Ｍｈ?３０ｃ??＾?〇Ｑ?＞Ｈ?ＨＨ?（—；?ＨＨ?Ｉｓ?Ｐｔ．ＢＢｌ：２ｂ?３５ｃ??ｐｉ；?（３Ｌ，?Ｊ?Ｊ?Ｐｅ＾?Ｃ＾）?ＯＯ??，?ＰｔＢＢＥＪＳａ??Ｉ?■１?■■■■■■■■—??＿?．，?ｆｉｍｉｉｕ????ＬＢ９ＢＨＩ■■歷北％??ｐｔｍｓｃ??Ｌ?￥?Ｓ?—，祕(mì)?３５ｃ??ＲＢ６?ｒ？？５??匕１?７＾“?３５ｃ??Ｌ?；；￡？．?Ｔｖｍ?Ｉ??ｔｌｍｌＳ１?Ｔｅ，ｍ?３５ｃ??ＰｔＢＢＦ．ｌ＜ｋ??１：；＾＾，；?ＰｔｍＥ９ｈ?３５ｃ??Ｐｔ〇ａ￡２ｂ??ＳＩ?ｎＢＨＨＶ￣｜／ＨＷ６ｉ；?３１ｃ??ＰｔＨ＾ｉ?ＰｔＢＢＥ２３ａ


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