發(fā)布時間：2021-07-12 23:10

　　目的:探究Bmi-1基因表達(dá)對K562細(xì)胞CPT化療敏感性的影響,并初步探討其凋亡機(jī)制。方法:1、采用瞬時轉(zhuǎn)染方法將pGenesil-2-Bmi-1 1 siRNA、p-MSCV-Bmi-1及其空白質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到K562細(xì)胞中,并采用RT-PCR及Western blot的方法分別檢測Bmi-1RNA和蛋白的表達(dá)情況。2、MTT實(shí)驗(yàn)檢測1-4天不同濃度化療藥物CPT對K562細(xì)胞的增殖抑制作用,找出最適作用時間和濃度。3、MTT實(shí)驗(yàn)觀察1-5天Bmi-1表達(dá)的改變對K562細(xì)胞CPT化療敏感性的影響。4、采用免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞內(nèi)γ-H2AX核聚焦點(diǎn)數(shù)來觀察細(xì)胞DSBs的程度。5、采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡來觀察Bmi-1基因表達(dá)對CPT誘導(dǎo)的K562細(xì)胞凋亡的影響。6、采用JC-1線粒體膜電位檢測實(shí)驗(yàn)來觀察細(xì)胞線粒體膜電位的變化。7、進(jìn)一步采用Western blot檢測線粒體凋亡途徑主要的凋亡蛋白Cytochrome C、Caspase-3、Bax、Bcl-2的表達(dá)。結(jié)果:1、轉(zhuǎn)染pGenesil-2-Bmi-1 1 siRNA與空白對照相比Bmi-1基因表達(dá)降低,轉(zhuǎn)染p-MSCV... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
前言
材料與方法
    1.實(shí)驗(yàn)材料
    2.實(shí)驗(yàn)所需試劑的配置
    3.實(shí)驗(yàn)所用主要儀器
    4.實(shí)驗(yàn)方法
結(jié)果
    1.pGenesil-2-Bmi-11 siRNA和p-MSCV-Bmi-1對K562細(xì)胞Bmi-1表達(dá)的改變
    2.CPT對 K562 細(xì)胞的增殖抑制作用
    3.Bmi-1基因表達(dá)在K562細(xì)胞對CPT化療敏感性中的作用
    4.Bmi-1基因表達(dá)在CPT誘導(dǎo)K562細(xì)胞DSBs中的作用
    5.Bmi-1基因表達(dá)在CPT誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡中的作用
    6.Bmi-1基因表達(dá)影響CPT誘導(dǎo)的K562細(xì)胞線粒體膜電位的改變.
    7.Bmi-1基因表達(dá)影響CPT誘導(dǎo)的K562細(xì)胞線粒體凋亡途徑相關(guān)蛋白的表達(dá)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3280833