在植物中,核心巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶（FUCT全稱為α-1,3-fucosyltransferase）通過N-糖基化修飾過程催化巖藻糖與N-聚糖相連,其產(chǎn)物核心巖藻糖繼續(xù)發(fā)生糖基化修飾,參與植物激素調(diào)控、次生代謝、脫毒反應(yīng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能。FUCT是參與巖藻糖糖基化過程的重要酶,它通過影響巖藻糖糖基化修飾從而對植物的生長發(fā)育產(chǎn)生影響,涉及到分蘗角度變化及纖維素合成等方面。本研究以沙柳（Salix psammophila）為研究材料,根據(jù)紅皮柳（Salix purpurea）巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因的CDS序列設(shè)計(jì)引物,通過PCR的方法,成功克隆了沙柳巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因的全長CDS序列,并命名為SpsFUCT。研究結(jié)果如下:1.同源克隆獲得沙柳FUCT全長1569bp的CDS序列,編碼522個(gè)氨基酸,分子量為58.74 KD,理論等電點(diǎn)為5.73。2.SpsFUCT蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測其為跨膜疏水性蛋白,含四個(gè)糖基化位點(diǎn),不含信號(hào)肽。同源蛋白結(jié)構(gòu)域、系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果表明,沙柳Sps FUCT與木本植物中的杞柳、毛果楊親緣關(guān)系最近,蛋白結(jié)構(gòu)域最相似;該蛋白屬于Glyco-transf-10家族,具有GT10... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

FUCT催化過程

圖 2 沙柳 RNA 質(zhì)量檢測ity Inspection of Total RNA in Sa克隆成 cDNA，用在 5’U，得到目標(biāo)基因條帶（ 2000bp。對目標(biāo)條帶進(jìn)合要求，經(jīng)分子分光光體 PDONR222 進(jìn)行 BP行 PCR 檢測，結(jié)果（存在非特異性擴(kuò)增，說

圖 2 沙柳 RNA 質(zhì)量檢測Fig. 2 Quality Inspection of Total RNA in Salix psammophila3.1.2 沙柳 FUCT 基因 CDS 的克隆以 RNA 為模板，反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA，用在 5’UTR 區(qū)和 3’UTR 區(qū)設(shè)計(jì)的引物對沙柳 cDNA 鏈進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，得到目標(biāo)基因條帶（圖 3），圖示擴(kuò)增條帶與目的基因目標(biāo)條帶大小一致，約為 2000bp。對目標(biāo)條帶進(jìn)行切膠回收，結(jié)果如圖 4 所示切膠回收產(chǎn)物目標(biāo)條帶大小符合要求，經(jīng)分子分光光度計(jì)檢測濃度及質(zhì)量均符合實(shí)驗(yàn)要求。將目標(biāo)基因與入門載體 PDONR222 進(jìn)行 BP 反應(yīng)，將產(chǎn)物用 DH5α 大腸桿菌進(jìn)行轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后對菌落進(jìn)行 PCR 檢測，結(jié)果（如圖 5）表明有 15 個(gè)白色菌斑條帶亮度和大小基本一致，不存在非特異性擴(kuò)增，說明載體連接成功，待下一步測序。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3270276