谷氨酸棒狀桿菌（Corynebacterium glutamicum,C.glutamicum）作為重要的工業(yè)生產(chǎn)菌株,由于其顯著的優(yōu)點(diǎn),不僅用于氨基酸等化合物的生產(chǎn),還被用于外源蛋白的表達(dá)。目前已經(jīng)有很多外源蛋白以C.glutamicum作為宿主成功表達(dá)的應(yīng)用,但是隨著研究的深入,蛋白表達(dá)產(chǎn)量低,可用基因編輯工具少等問題限制了C.glutamicum作為外源蛋白表達(dá)宿主的應(yīng)用。本研究首先利用CRISPR/Cas9技術(shù),在C.glutamicum中構(gòu)建了一套高效的基因編輯工具。同時以C.glutamicum CGMCC1.15647為出發(fā)菌株,通過分析不同溶氧狀態(tài)下細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)發(fā)掘外源蛋白表達(dá)過程中相關(guān)的靶點(diǎn)基因。在此基礎(chǔ)上,利用CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)對發(fā)掘的優(yōu)化靶點(diǎn)（mepA,porB和clpC）進(jìn)行宿主細(xì)胞改造,改造后的宿主細(xì)胞具有外源蛋白表達(dá)能力提高的特點(diǎn),并成功的利用該優(yōu)化后的宿主實(shí)現(xiàn)了N端腦鈉肽前體（N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP）在C.glutamicum中的表達(dá)。最后還研究了mepA和po... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

CRISPR/Cas系統(tǒng)作用機(jī)制示意圖

圖 1-2 Clp 蛋白酶結(jié)構(gòu)示意圖Fig. 1-2 The structure of Clp protease complex在 E. coli 中發(fā)現(xiàn)，廣泛存在各種細(xì)菌、真菌、高等植族的蛋白組成 Clp 蛋白酶的催化亞基，調(diào)節(jié)亞基主要

圖 1-3 研究思路Fig. 1-3 The framework of this thesis要研究內(nèi)容：1）適用于 C. glutamicum 的 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)的開發(fā)及優(yōu)化。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]代謝工程方法改造谷氨酸棒狀桿菌生產(chǎn)乙偶姻[J]. 馬紅武,劉會娟,朱年青,陳濤.  天津大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)與工程技術(shù)版). 2014(11)
[4]PhoPR雙組分系統(tǒng)與結(jié)核病的研究進(jìn)展[J]. 梁晨,張萬江.  中國病原生物學(xué)雜志. 2013(09)
[5]運(yùn)動發(fā)酵單胞菌限制-修飾系統(tǒng)缺失突變株的構(gòu)建及其性質(zhì)分析（英文）[J]. 吳波,何明雄,馮紅,張艷,胡啟春,張義正.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報. 2013(02)
[6]限制修飾系統(tǒng)cglI賦予鈍齒棒桿菌抗噬菌體功能活性[J]. 胡永飛,李鐵民,楊智勇,張博,李玉.  生物工程學(xué)報. 2008(05)
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博士論文
[1]利用CRISPR/Cas9進(jìn)行基因編輯[D]. 沈彬.南京大學(xué) 2014

碩士論文
[1]重組大腸桿菌和重組谷氨酸棒狀桿菌生產(chǎn)番茄紅素的研究[D]. 杜穩(wěn).天津科技大學(xué) 2016



本文編號：3266756