研究旨在克隆豬流行性腹瀉病毒（PEDV）HuN-HY1902毒株N、sM、ORF3基因并進(jìn)行序列分析,為PEDV的臨床防控提供依據(jù)。采用Vero細(xì)胞進(jìn)行病毒分離培養(yǎng),免疫過氧化酶單層細(xì)胞染色法進(jìn)行病毒鑒定;RT-PCR擴(kuò)增PEDV HuN1902毒株N、S、sM、ORF3基因,經(jīng)純化后進(jìn)行序列測定,利用DNAStar、Mega等生物信息學(xué)軟件進(jìn)行序列分析。R T-PCR擴(kuò)增得到PEDV ORF3、N、sM片段大小依次為744 bp、1400 bp、和1100 bp。該毒株ORF3基因核苷酸序列與PEDV/USA/Missouri130/2015毒株相似性最高,為99.7%;sM基因核苷酸序列與CH/SCMY/2018和BJ-2011-1相似性最高毒株,為96.3%;N基因核苷酸序列與CH/SCMY/2018毒株相似性最高,為98.6%;ORF3、N和sM基因核苷酸序列與疫苗毒株CV777依次為96%、95.1%和93.9%。進(jìn)化分析顯示,該毒株的ORF3、sM和N基因的核苷酸序列與2018年流行毒株CH/SCMY/2018處于同一分支,而與經(jīng)典毒株CV777、SM98的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。所... 

【文章來源】：湖南畜牧獸醫(yī). 2020,(05)

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【部分圖文】：

PEDV Hu N12感染Vero細(xì)胞IPMA

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.2%的瓊脂糖電泳檢測，結(jié)果在約744 bp、1100 bp和1400 bp處得到了特異性的擴(kuò)增條帶（圖2），與預(yù)期片段長度相符。PCR產(chǎn)物2.3 PEDV Hu N-HY1902毒株的O R F3、s M和N基因序列分析

進(jìn)化分析表明，PEDV Hu N-HY1902毒株與2018年的流行毒株如CH-SCMY-2018、PEDV-MEX-QRO、處于同一分支，均屬于基因Ⅰ群。與經(jīng)典疫苗株CV777、SM98、DR13不在同一分支，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)（圖5）。3 討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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