稀有瀕危物種金鐵鎖（Psammosilene tunicoides）為石竹科（Caryophyllaceae）單種屬植物,以根入藥,是“云南白藥”的主成分之一,主要有效成分為金鐵鎖三萜總皂苷。金鐵鎖自然繁殖力低,生長緩慢,加之金鐵鎖藥材大部分依賴野生采挖,使之野生資源日益減少,幾近枯竭,已不能滿足市場需求。從分子水平闡明金鐵鎖三萜總皂苷生物合成途徑,找到控制三萜皂苷合成的關鍵酶基因,利用基因工程技術對金鐵鎖三萜皂苷進行體外合成,是獲得金鐵鎖三萜皂苷快速而有效的新途徑。本研究從金鐵鎖中克隆了4個可能參與三萜皂苷合成關鍵酶基因,成功構建原核表達體系誘導蛋白表達,檢測了關鍵酶基因的組織表達差異。主要研究內容如下:基于課題組前期研究中所獲得的金鐵鎖轉錄組信息,從大量轉錄本信息中篩選了可能參與金鐵鎖三萜皂苷合成的序列,包括參與三萜前體形成的3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMGR）、法尼基焦磷酸合成酶（FPS）,骨架構建階段的鯊烯環(huán)氧酶（SE）,以及修飾階段的細胞色素P450單加氧酶（P450）等關鍵酶基因。根據轉錄本序列,設計各基因的全長擴增引物,利用RT-PCR方法獲得金鐵鎖各基因的全... 

【文章來源】：云南中醫(yī)藥大學云南省

【文章頁數】：110 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
第一章 金鐵鎖HMGR的克隆、原核表達及生物信息學分析
    第一節(jié) 實驗材料、試劑及儀器
        1 實驗材料
        2 實驗試劑
        3 實驗儀器
    第二節(jié) 實驗方法
        1 金鐵鎖HMGR基因克隆
        2 HMGR基因的原核表達
        3 HMGR生物信息學分析
    第三節(jié) 實驗結果
        1 金鐵鎖根部RNA的提取
        2 金鐵鎖HMGR的克隆
        3 金鐵鎖HMGR的原核表達
        4 金鐵鎖HMGR的生物信息學分析
第二章 金鐵鎖FPS的克隆、原核表達及生物信息學分析
    第一節(jié) 實驗材料、試劑及儀器
    第二節(jié) 實驗方法
    第三節(jié) 實驗結果
        1 金鐵鎖FPS的克隆
        2 金鐵鎖FPS的原核表達
        3 金鐵鎖FPS的生物信息學分析
第三章 金鐵鎖SE的克隆、原核表達及生物信息學分析
    第一節(jié) 實驗材料、試劑及儀器
    第二節(jié) 實驗方法
    第三節(jié) 實驗結果
        1 金鐵鎖SE的克隆
        2 金鐵鎖SE的原核表達
        3 金鐵鎖SE的生物信息學分析
第四章 金鐵鎖P450的克隆、原核表達及生物信息學分析
    第一節(jié) 實驗材料、試劑及儀器
    第二節(jié) 實驗方法
    第三節(jié) 實驗結果
        1 金鐵鎖P450的克隆
        2 金鐵鎖P450的原核表達
        3 金鐵鎖P450的生物信息學分析
第五章 金鐵鎖8個關鍵酶基因的表達分析
    第一節(jié) 實驗材料、試劑及儀器
        1 實驗材料
        2 實驗試劑
        3 實驗儀器
    第二節(jié) 實驗方法
        1 金鐵鎖根、莖、葉RNA提取
        2 cDNA合成
        3 確定進行熒光檢測的基因及引物設計
        4 Real-time PCR反應
    第三節(jié) 實驗結果
第六章 討論
第七章 文獻綜述
    第一節(jié) 植物萜類化合物生物合成途徑及其關鍵酶
        1 植物萜類化合物生物合成途徑
        2 甲羥戊酸途徑中的關鍵酶
    第二節(jié) 金鐵鎖及其三萜皂苷的研究現狀
        1 金鐵鎖簡介
        2 金鐵鎖三萜皂苷的研究
    第三節(jié) 實時熒光定量PCR
    第四節(jié) 本研究的目的及意義
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3257110