稀有瀕危物種金鐵鎖（Psammosilene tunicoides）為石竹科（Caryophyllaceae）單種屬植物,以根入藥,是“云南白藥”的主成分之一,主要有效成分為金鐵鎖三萜總皂苷。金鐵鎖自然繁殖力低,生長(zhǎng)緩慢,加之金鐵鎖藥材大部分依賴(lài)野生采挖,使之野生資源日益減少,幾近枯竭,已不能滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。從分子水平闡明金鐵鎖三萜總皂苷生物合成途徑,找到控制三萜皂苷合成的關(guān)鍵酶基因,利用基因工程技術(shù)對(duì)金鐵鎖三萜皂苷進(jìn)行體外合成,是獲得金鐵鎖三萜皂苷快速而有效的新途徑。本研究從金鐵鎖中克隆了4個(gè)可能參與三萜皂苷合成關(guān)鍵酶基因,成功構(gòu)建原核表達(dá)體系誘導(dǎo)蛋白表達(dá),檢測(cè)了關(guān)鍵酶基因的組織表達(dá)差異。主要研究?jī)?nèi)容如下:基于課題組前期研究中所獲得的金鐵鎖轉(zhuǎn)錄組信息,從大量轉(zhuǎn)錄本信息中篩選了可能參與金鐵鎖三萜皂苷合成的序列,包括參與三萜前體形成的3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMGR）、法尼基焦磷酸合成酶（FPS）,骨架構(gòu)建階段的鯊烯環(huán)氧酶（SE）,以及修飾階段的細(xì)胞色素P450單加氧酶（P450）等關(guān)鍵酶基因。根據(jù)轉(zhuǎn)錄本序列,設(shè)計(jì)各基因的全長(zhǎng)擴(kuò)增引物,利用RT-PCR方法獲得金鐵鎖各基因的全... 

【文章來(lái)源】：云南中醫(yī)藥大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：110 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
第一章 金鐵鎖HMGR的克隆、原核表達(dá)及生物信息學(xué)分析
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3 實(shí)驗(yàn)儀器
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
        1 金鐵鎖HMGR基因克隆
        2 HMGR基因的原核表達(dá)
        3 HMGR生物信息學(xué)分析
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 金鐵鎖根部RNA的提取
        2 金鐵鎖HMGR的克隆
        3 金鐵鎖HMGR的原核表達(dá)
        4 金鐵鎖HMGR的生物信息學(xué)分析
第二章 金鐵鎖FPS的克隆、原核表達(dá)及生物信息學(xué)分析
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 金鐵鎖FPS的克隆
        2 金鐵鎖FPS的原核表達(dá)
        3 金鐵鎖FPS的生物信息學(xué)分析
第三章 金鐵鎖SE的克隆、原核表達(dá)及生物信息學(xué)分析
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 金鐵鎖SE的克隆
        2 金鐵鎖SE的原核表達(dá)
        3 金鐵鎖SE的生物信息學(xué)分析
第四章 金鐵鎖P450的克隆、原核表達(dá)及生物信息學(xué)分析
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 金鐵鎖P450的克隆
        2 金鐵鎖P450的原核表達(dá)
        3 金鐵鎖P450的生物信息學(xué)分析
第五章 金鐵鎖8個(gè)關(guān)鍵酶基因的表達(dá)分析
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3 實(shí)驗(yàn)儀器
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
        1 金鐵鎖根、莖、葉RNA提取
        2 cDNA合成
        3 確定進(jìn)行熒光檢測(cè)的基因及引物設(shè)計(jì)
        4 Real-time PCR反應(yīng)
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第六章 討論
第七章 文獻(xiàn)綜述
    第一節(jié) 植物萜類(lèi)化合物生物合成途徑及其關(guān)鍵酶
        1 植物萜類(lèi)化合物生物合成途徑
        2 甲羥戊酸途徑中的關(guān)鍵酶
    第二節(jié) 金鐵鎖及其三萜皂苷的研究現(xiàn)狀
        1 金鐵鎖簡(jiǎn)介
        2 金鐵鎖三萜皂苷的研究
    第三節(jié) 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    第四節(jié) 本研究的目的及意義
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3257110