E類MADS-box基因SEPALLATA （SEP）-like在被子植物生殖生長特別是花器官發(fā)育方面具有重要作用。為分析羽衣甘藍(lán)E功能MADS-box基因SEP-like基因的序列特征及其在花發(fā)育過程中的時空表達(dá)模式,以羽衣甘藍(lán)品系‘14 line’為試材,利用cDNA末端快速擴(kuò)增（Rapid amplification of cDNA ends,RACE）技術(shù)克隆了SEP直系同源基因BroaSEP1/2/3 （GenBank登錄號:KC967957、KC967958、KC967960）。序列和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明,這3個基因分別與野甘藍(lán)（Brassica oleracea var. oleracea）、蕪菁Brassica rapa、蘿卜Raphanus sativus、甘藍(lán)型油菜Brassica napus的SEP1、SEP2、SEP3基因具有很高的同源性。推導(dǎo)的氨基酸序列顯示,這些基因編碼的蛋白質(zhì)都包含高度保守的MADS結(jié)構(gòu)域、I結(jié)構(gòu)域和K結(jié)構(gòu)域,每一基因都有其亞家族特異的C-末端功能域SEPⅠ和SEPⅡ基序。BroaSEP1、BroaSEP2、BroaSEP3基因的開放閱讀框長... 

【文章來源】：生物工程學(xué)報(bào). 2020,36(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：15 頁

【部分圖文】：

羽衣甘藍(lán)野生型及突變型花

羽衣甘藍(lán)花發(fā)育的5個時期

混合花蕾(花)的總RNA經(jīng)Oligo(d T)17錨定引物反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈c DNA，用Broa SEP1、Broa SEP2、Broa SEP3基因特異引物和接頭引物進(jìn)行巢式5′-RACE擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物回收、克隆、測序，克隆獲得了Broa SEP1、Broa SEP2、Broa SEP3基因的5′-c DNA序列，長度分別為312 bp、536 bp和580 bp。用DNAMAN軟件分別將Broa SEP1/2/3基因3′和5′序列進(jìn)行拼接，得到3個基因的全長c DNA序列(圖4)。最后用3個基因各自的特異引物(Broa SEP1-F/Broa SEP1-R、Broa SEP2-F/Broa SEP2-R、Broa SEP3-F/Broa SEP3-R，表1)擴(kuò)增，確定了c DNA序列的準(zhǔn)確性。Broa SEP1、Broa SEP2、Broa SEP3基因的Gen Bank登錄號為分別為KC967957、KC967958、KC967960。利用NCBI的開放閱讀框預(yù)測工具(Open reading frame finder)進(jìn)行最大開放閱讀框推測。結(jié)果表明，Broa SEP1的開放閱讀框長801 bp，編碼266個氨基酸，包含73個氨基酸殘基的MADS結(jié)構(gòu)域、27個氨基酸殘基的I結(jié)構(gòu)域、87個氨基酸殘基的K結(jié)構(gòu)域、79個氨基酸殘基的C結(jié)構(gòu)域(圖4)。理論等電點(diǎn)p I為9.05，分子量為30.6 k Da。Broa SEP2的開放閱讀框長759 bp，編碼252個氨基酸，包含57個氨基酸殘基的MADS結(jié)構(gòu)域、31個氨基酸殘基的I結(jié)構(gòu)域、87個氨基酸殘基的K結(jié)構(gòu)域、77個氨基酸殘基的C結(jié)構(gòu)域(圖4)。理論等電點(diǎn)p I為8.65，分子量為28.8 k Da。Broa SEP3的開放閱讀框長753 bp，編碼250個氨基酸，包含57個氨基酸殘基的MADS結(jié)構(gòu)域、31個氨基酸殘基的I結(jié)構(gòu)域、87個氨基酸殘基的K結(jié)構(gòu)域、75個氨基酸殘基的C結(jié)構(gòu)域(圖4)。理論等電點(diǎn)p I為7.68，分子量為28.9 k Da。圖4 羽衣甘藍(lán)Broa SEP c DNA的核苷酸序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列


本文編號：3245902