目的:研究位于CTH（Cystathionine-gamma-lyase）基因3’非翻譯區(qū)（3’untranslated region,3’UTR）內(nèi)的四堿基插入/缺失（Ins/Del,Indel）多態(tài)位點(diǎn)（rs1 13044851）與中國漢族人群心源性猝死（Sudden cardiac death,SCD）風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián),并通過基因型-表型關(guān)聯(lián)分析及生物信息學(xué)方法探究該多態(tài)在SCD發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的作用及其潛在分子機(jī)制。方法:（1）運(yùn)用生物信息學(xué)工具篩選一批CTH基因3’UTR內(nèi)的多態(tài)位點(diǎn),并選取其中一個具有潛在功能的多態(tài)位點(diǎn)（rs1 13044851）作為候選遺傳標(biāo)記。使用病例-對照研究方法（112例SCD和417例正常對照）,采集血液樣本,提取基因組DNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,通過聚丙烯酰胺凝膠電泳對該候選多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行基因分型,運(yùn)用Logistic回歸分析法對多態(tài)與SCD風(fēng)險(xiǎn)間的相關(guān)性進(jìn)行分析;（2）使用免疫印跡法（Western blot,WB）檢測不同基因型個體心肌組織中CTH蛋白的表達(dá)水平,并分析基因型與蛋白質(zhì)表達(dá)量之間的關(guān)聯(lián);（3）使用Miranda軟件預(yù)測可與CTH基因3 ’ U... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．?Ｃ７７／多態(tài)性位點(diǎn)（ｒｓ?１１３０４４８５１?＞等位基因測序圖??Ｆｉｇ?２．?Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＣＴＨ?（ｒｓｌ?１３０４４８５１）??

?１３０４４８５１多態(tài)位點(diǎn)插入型和缺失型等位基因的重組報(bào)告載體??ＰＧＬ３－ＣＴＨ－ＭＴ和ｐＧＬ３－ＣＴＨ－ＷＴ，并與ｐＲＬ－ＳＶ４０?（表達(dá)海腎熒光素酶）載體共??同轉(zhuǎn)染２９３Ｔ細(xì)胞系，設(shè)立ｐＧＬ３－ＣＴＨ－ＷＴ／ＭＴ實(shí)驗(yàn)組和對照組，其中實(shí)驗(yàn)組加入??ｍｉＲ－ｌ３２４?ｍｉｍｉｃ，對照組力ｎ入ｍｉｍｉｃ?ｃｏｎｔｒｏｌ，培養(yǎng)２４ｈ后分另ｌｌ檢測兩種焚光素酶活??性，并計(jì)算比值。結(jié)果顯示，與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組的報(bào)告基因表達(dá)受到抑制，??且與ＷＴ實(shí)驗(yàn)組相比，ＭＴ實(shí)驗(yàn)組的抑制效果更加明顯（圖５）。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明??ｒｓｌ?１３０４４８５１多態(tài)插入型序列可能通過與ｍｉＲ－１３２４結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄后水平抑制ＣＴ／／??基因的表達(dá)；缺失型序列則下擾ｍｉＲ－１３２４與ｍＲＮＡ的結(jié)合，減弱了對Ｃ７７／基因??表達(dá)的抑制作用。??ＣＪ?ＭＴ＋ｍｉＲ－１３２４??＾?＾３?ＭＴ＋ｍｉｍｉｃ－ｃｏｎｔｒｏｌ??２．０－Ｉ?Ｓ?ＷＴ＋ｍｉＲ－１３２４??＾?ＷＭ?ＷＴ＋ｍｉｍｉｃ－ｃｏｎｔｒｏｌ?圓??圖５？雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測０７／多態(tài)位點(diǎn)（ｒｓｌｌ３０４４８５１?）對基因轉(zhuǎn)錄活性的影響??Ｆｉｇ?５．?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＣＴＨ?（ｒｓｌ?１３０４４８５１）?ｏｎ?ｇｅｎｅ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ａｓ?ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ?ｂｙ??Ｄｕａｌ－ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ?ａｓｓａｙ?ｓｙｓｔｅｍ??注：＃表示Ｐ＜０．０５?（相較于ＷＴ實(shí)驗(yàn)組）；＊表示Ｐ＜０．０５，（相較于ＭＴ對照組）??２０??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]冠心病患者血漿中新型氣體信號分子硫化氫的變化[J]. 江海龍,吳宏超,李志梁,耿彬,唐朝樞.  第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2005(08)



本文編號：3244455