目的探索細粒棘球蚴水通道蛋白（Echinococcus granulosus aquaporins,EgAQPs）在棘球蚴液形成過程中的作用。方法收集體外培養(yǎng)不同時期的棘球蚴標本和BALB/c小鼠體內(nèi)接種的繼發(fā)棘球蚴標本,RT-qPCR方法檢測12個EgAQPs基因在體內(nèi)、體外培養(yǎng)不同發(fā)育時期的轉(zhuǎn)錄表達。以細粒棘球蚴cDNA為模板,擴增EgAQP、EgAQP1、EgAQP3、EgAQP4-1、EgAQP4-4和EgAQP9-1 6個基因編碼區(qū)片段,同時,通過化學合成方法擴增另外6個EgAQPs（EgAQPAn.G、EgAQPFA-CHIP、EgAQP4-2、EgAQP4-3、EgAQP4-5、EgAQP9-2）基因編碼區(qū)片段,并在非洲爪蟾卵母細胞中檢測這12個EgAQPs基因的透水功能,Western blot檢測EgAQPs在卵母細胞膜上的表達。結(jié)果體外培養(yǎng)的原頭蚴及感染小鼠的繼發(fā)棘球蚴體積均隨培養(yǎng)時間的延長而逐漸增大,棘球蚴囊內(nèi)透明液體增多。RT-qPCR結(jié)果顯示12個EgAQPs基因在體內(nèi)、體外培養(yǎng)不同發(fā)育時間的轉(zhuǎn)錄表達水平均較低。注射EgAQPs基因的非洲爪蟾卵母細胞的體積變化... 

【文章來源】：第三軍醫(yī)大學學報. 2020,42(21)北大核心CSCD

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體外培養(yǎng)0～180 d的囊化原頭蚴光學顯微鏡觀察 (×20)

圖1 體外培養(yǎng)0～180 d的囊化原頭蚴光學顯微鏡觀察 (×20)2.3 RT-qPCR檢測體內(nèi)、體外培養(yǎng)不同時期囊化原頭蚴EgAQPs基因轉(zhuǎn)錄表達水平

以ATP6和NDI作為內(nèi)參基因,RT-qPCR檢測小鼠體內(nèi)培養(yǎng)不同時期(45 d至15個月)的繼發(fā)棘球蚴AQPs基因相對轉(zhuǎn)錄表達水平(圖3B)。EgAQP、EgAQPAn.G、EgAQPFA-CHIP、EgAQP1、EgAQP3、EgAQP4-3、EgAQP4-5、EgAQP9-1和EgAQP9-2檢測幾乎無信號;EgAQP4-1、EgAQP4-2和EgAQP4-4基因雖然有相對轉(zhuǎn)錄表達值,但其值都太低,所有AQPs中最大相對轉(zhuǎn)錄表達值僅有0.065。2.4 棘球蚴12個EgAQPs及陽性對照RnAQP1基因擴增及重組質(zhì)粒鑒定


本文編號：3241728