甲殼動(dòng)物的蛻皮與生長(zhǎng)密切相關(guān)。已有的研究表明蛻皮抑制激素MIH在甲殼動(dòng)物蛻皮過程中起著負(fù)調(diào)節(jié)作用。但是,由于甲殼動(dòng)物功能基因研究平臺(tái)的限制,迄今為止未見在活體內(nèi)通過基因敲除的方法對(duì)甲殼動(dòng)物MIH基因功能進(jìn)行研究的報(bào)道。在前期研究中,本課題組成功實(shí)現(xiàn)了基于CRISPR/Cas9技術(shù)的脊尾白蝦基因組編輯。本論文以脊尾白蝦為研究對(duì)象,在其轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上,成功獲得了脊尾白蝦MIH（Ec MIH）的全長(zhǎng)序列,并對(duì)該基因表達(dá)特征進(jìn)行了分析。在此基礎(chǔ)上,通過共注射體外轉(zhuǎn)錄的Cas9 m RNA和g RNA的方法成功敲除了Ec MIH,獲得幼體發(fā)育時(shí)間縮短的脊尾白蝦個(gè)體,同時(shí)對(duì)其功能進(jìn)行了初步研究。此外,本研究成功構(gòu)建了Cas9核酸內(nèi)切酶的分泌型表達(dá)載體p CT7-CHISP6H-Cas9,制備了Cas9重組蛋白,并在體外檢測(cè)了其對(duì)脊尾白蝦基因組編輯的可行性。主要結(jié)果歸納為以下兩個(gè)方面:1.通過對(duì)脊尾白蝦轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析和PCR驗(yàn)證確定了脊尾白蝦Ec MIH的基因信息,獲得了該基因的全長(zhǎng)序列。Ec MIH的開放閱讀框編碼119個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)的分子量為13747.82 Da,等電點(diǎn)8.61,其基因由3個(gè)... 

【文章來源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院海洋研究所)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

甲殼動(dòng)物蛻皮調(diào)控機(jī)制(李旭光等，2014)

IH 調(diào)控甲殼動(dòng)物蛻皮激素產(chǎn)生的信號(hào)通路(Chang and Myosed MIH signaling pathway regulating ecdysteroidogenesis iH 的研究主要集中在 MIH 多肽與基因結(jié)構(gòu)、眼柄用機(jī)制以及 Y-器官對(duì) MIH 應(yīng)答等幾個(gè)方面。由于限制，大多數(shù)關(guān)于 MIH 的研究主要還是維持在體H 的在體內(nèi)的研究，對(duì)于更加深入的了解 MIH 的生9 簡(jiǎn)介是細(xì)菌和古細(xì)菌的 種天然免疫系統(tǒng)，通過特異性應(yīng)序列進(jìn)行切割，從而達(dá)到對(duì)自身的免疫(GasiunaRISPR 和 Cas 兩部分結(jié)構(gòu)（圖 1.3）（圖片引自 w

圖 1.3 CRISPR/Cas 基因結(jié)構(gòu)Figure 1.3 Structure diagram of CRISPR/Cas987 年，CRISPR 重復(fù)序列最早在大腸桿菌基因組中發(fā)現(xiàn)，該基因存在 5 段peat）并被不重復(fù)的間隔序列（spacer）隔開(Ishino et al. 1987)。而直到研菌體和質(zhì)粒中的部分序列與 CRISPR 中重復(fù)序列之間的間隔序列相似in et al. 2005; Mojica et al. 2005; Pourcel et al. 2005)，對(duì) CRISPR 的研究才出gou 等（2007）證實(shí) CRISPR 中的間隔序列來自于病毒的基因組，噬菌體其基因組被細(xì)菌整合成 CRISPR 中的間隔序列，并且細(xì)菌對(duì)噬菌體的免疫序列的改變而改變(Barrangou et al. 2007)。而Cas蛋白則最早是被Jansen等ISPR 位點(diǎn)附近發(fā)現(xiàn)，同時(shí)研究人員還預(yù)測(cè) Cas 蛋白具有 DNA 解旋酶和核但是具體功能還不確定(Jansen et al. 2002)。2005 年，Cas 蛋白的成員之為核酸內(nèi)切酶，即為現(xiàn)在研究火熱的 Cas9 蛋白(Haft et al. 2005)。2008 年， 蛋白之間的作用關(guān)系初次被 Brouns 等揭示，該研究表明 CRISPR 中的間

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]甲殼動(dòng)物蛻皮相關(guān)基因的研究進(jìn)展[J]. 蒲紅雙,高祥剛,侯紅漫,赫崇波,張振宇,史井運(yùn).  水產(chǎn)科學(xué). 2015(06)
[2]水生甲殼類蛻皮發(fā)生過程及其影響因素的研究與進(jìn)展[J]. 李旭光,周剛,谷孝鴻.  動(dòng)物學(xué)雜志. 2014(02)
[3]青蝦咽側(cè)體抑制激素基因全長(zhǎng)cDNA序列的克隆及表達(dá)分析[J]. 卜憲飛,李真真,喬慧,傅洪拓,吳滟,龔永生,蔣速飛,熊貽偉.  水生生物學(xué)報(bào). 2013(01)
[4]克氏原螯蝦大顎器合成甲基法尼酯的研究[J]. 趙維信,白樺.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2001(03)
[5]蝦蟹類眼柄激素的生理生化及基因克隆研究進(jìn)展[J]. 張愛萍.  水產(chǎn)學(xué)雜志. 2001(01)
[6]脊尾白蝦的幼體發(fā)育[J]. 王緒峨.  海洋科學(xué). 1991(01)

碩士論文
[1]脊尾白蝦繁殖生物學(xué)及人工苗種繁育技術(shù)的研究[D]. 栗治國(guó).中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2013



本文編號(hào)：3233652