帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一種嚴(yán)重危害人類健康的神經(jīng)退行性疾病。在我國(guó),每年有近10萬(wàn)人被診斷為新發(fā)的PD患者。PD的病理特點(diǎn)包括神經(jīng)元胞漿內(nèi)出現(xiàn)特征性嗜酸包涵體——路易小體（Levy body）,以及基底神經(jīng)節(jié)黑質(zhì)紋狀體環(huán)路障礙多巴胺（DA）能神經(jīng)元變性缺失。臨床表現(xiàn)分為運(yùn)動(dòng)癥狀（靜止性震顫、肌強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)遲緩和姿勢(shì)步態(tài)異常等）和非運(yùn)動(dòng)癥狀（認(rèn)知障礙、睡眠障礙、排泄障礙等等）。為了進(jìn)一步了解PD的發(fā)病機(jī)制及潛在的治療靶點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)?zāi)M突變型LRRK2G2019S及α-synucleinA53T的雙轉(zhuǎn)基因PD果蠅和小鼠模型,篩選更好的模擬PD的雙轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型。對(duì)已構(gòu)建的PD果蠅模型以1 μM的大豆異黃酮（soy isoflavone）給予終生干預(yù)。1 8月齡的PD小鼠以30 mg/kg灌胃（i.g.）14天,結(jié)果顯示,大豆異黃酮能夠改善PD果蠅的壽命,對(duì)PD果蠅和小鼠的行為學(xué)都有所改變,并且在黑質(zhì)和紋狀體內(nèi)提高了 TH、Nrf2、GCLC表達(dá)量,降低α-synuclein、p-LRRK2、p-JNK MAPK、p-p38 MAPK表達(dá)水平,對(duì)于多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．三種糢式果蠅的繁殖率以及生命周期的檢測(cè)（ｍｅａｎ士ＳＦＭ：?ｎ＝８０?＊．?Ｐ?＜０．０５．??＊＊，Ｐ＜０．０丨＊＊＊，ＰＯ．ＯＯｌ）??３?Ｓｙｎ－Ａ５３Ｔ；；?ＬＲＫＫ２－ＧＳ２雙轉(zhuǎn)基因果蠅的運(yùn)動(dòng)能力??

第一部分?大豆異黃酮對(duì)Ｕ＜ＲＫ２？ｌｌｌ９ｓ和ｕ－ＳｙｎｗＴ雙轉(zhuǎn)基因｜＞Ｄ動(dòng)物模型的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制研宄??一共九周的運(yùn)動(dòng)能力的檢測(cè)過(guò)程中，三種模式果蠅的運(yùn)動(dòng)水平皆不如對(duì)照組，在??第三、四、五、六、七周較為明顯（圖３，?ａ）。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組ＴＨ－ＧＡＬ４??相比，Ｓｙｎ－Ａ５３Ｔ：；ＬＲＲＫ２－ＧＳ２／ＴＨ、ＵＬＲＲＫ２－ＧＳ／ＴＨ兩種果蠅在第五周時(shí)均有顯??著性差異（圖３，?ａ和ｂ）?（＊＊，?Ｐ＜０．０１）；第六周時(shí)，三種模式果蠅的運(yùn)動(dòng)能力均呈??下降趨勢(shì)，且都具有顯著性差異（圖３，?ａ和ｂ）。在第七周時(shí)，除了對(duì)照組有果蠅能??爬過(guò)我們?cè)O(shè)置的行為學(xué)測(cè)試線，其他組的果蠅均不能在有限的時(shí)間內(nèi)爬過(guò)我們的??測(cè)試線。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，構(gòu)建的雙轉(zhuǎn)基因果蠅Ｓｙｎ－Ａ５３Ｔ；；?ＬＲＲＫ２－ＧＳ２或者??ＬＲＲＫ２－ＧＳ２能很好的模擬帕金森氏病，為下一步研究做一個(gè)很好的基矗??ａ??—??????模式果蠅運(yùn)動(dòng)能力的比較??１２３４２６?７?８??—ＴＨ－Ｇｓｉ?――?ＳｒＡ５３Ｔ．．Ｔ＞ｒ＾?＊—？＊？?．．ＬＲＲＫ２Ｇ２Ｄ?ｉＳＳ＾Ｈ?－?ｉｙｎ＾３Ｔ／－－；；ＬＳＳＩ＜．２（Ｓ＞．／ｒＨ??ｂ－?Ｆｉｖｅｔｈ?ｗｅｅｋ?ｃ．?ｓｉｘｔｈ?ｗｅｅｋ??０．４－Ｉ?〇？＜？??＾?０．３－?爸?０?３．??ｉ。．１．?■?ｌｉｌｉ?干?ｆ。．１．?■??Ｊ＿?．?，?，?Ｊ＿?’?＿?Ｔ??＾?／?，／?＾??圖３．三種模式果蠅運(yùn)動(dòng)能力的檢測(cè)比較以及統(tǒng)計(jì)分析（ｍｅａｎ±ＳＥＭ；?ｎ＝８０??＊，Ｐ＜０．０１?）??４轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定和篩選??４．１?ＰＣＲ檢測(cè)鑒定ＬＲＲＫ２－Ｇ

大豆異黃酮對(duì)［及１＜１＜２｛＾｜？和《－８＞＋１１？「雙轉(zhuǎn)基因ＰＩ）動(dòng)物模型的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制研究?第一部分??性條帶，泳道０為陽(yáng)性對(duì)照，Ｉ為陰性對(duì)照，以此判定具有陽(yáng)性條帶的為ＬＲＲＫ２－ＧＳ２??陽(yáng)性雜合小鼠。??圖４．?ＬＲＲＫ２－ＧＳ２陽(yáng)性雜合小鼠鑒定??４．２?ＰＣＲ檢測(cè)鑒定ＬＲＲＫ２－ＧＳ２轉(zhuǎn)基因純合小鼠??將Ｆ１代ＬＲＲＫ２－ＧＳ２陽(yáng)性雜合小鼠相互雜交獲得Ｆ２，?Ｆ２的基閃型可能為??ＬＲＲＫ２－ＧＳ２雜合、ＬＲＲＫ２－ＧＳ２雜合純合或陰性三種，因此再將Ｆ２鑒定，鑒定后??Ｆ２代中的ＬＲＲＫ２－ＧＳ２陽(yáng)性小鼠與陰性小鼠測(cè)交獲得子代Ｆ３。鑒定結(jié)果如圖５所??示，由于Ａ、Ｃ組小鼠后代均出現(xiàn)陰性結(jié)果，可判定為Ｆ２代中的ＬＲＲＫ２－ＧＳ２為??陽(yáng)性雜合小鼠，而Ｂ組的小鼠均為陽(yáng)性，ｎｊ判斷４?Ｂ組對(duì)應(yīng)的Ｆ２中的ＬＲＲＫ２－ＧＳ２??為ｍ性純介小鼠，以此鑒別純合子小鼠，繁育足夠數(shù)量我們所需的小鼠。??＇?＾＾?，??圖５．?ＬＲＲＫ２－ＧＳ２陽(yáng)性純合小鼠鑒定??４．３?ＰＣＲ檢測(cè)鑒定ＬＲＲＫ２－ＧＳ２／ＳＹＮ－Ａ５３Ｔ雙轉(zhuǎn)基因小鼠??為丫獲得雙轉(zhuǎn)袪因小鼠，將ＬＲＲＫ２－ＧＳ２雜合小鼠與Ａ５３Ｔ雜合小鼠進(jìn)行雜交，??１７??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3230597