SPO11-3蛋白是真核生物拓?fù)洚悩?gòu)酶VIA同系物之一,具有調(diào)控如生長發(fā)育與脅迫響應(yīng)等重要生物學(xué)功能。在本實(shí)驗(yàn)室已取得的研究結(jié)果即通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的VIGS方法沉默GhSPO11-3,沉默植株系均表現(xiàn)出明顯的矮化,細(xì)胞尺寸減小以及核內(nèi)復(fù)制障礙等特征。進(jìn)一步對沉默植株進(jìn)行鹽脅迫處理得知GhSPO11-3正向調(diào)控了植株抗鹽耐性為基礎(chǔ)^[1]。本實(shí)驗(yàn)繼續(xù)通過VIGS方法將目的基因沉默探討GhSPO11-3是否參與植物抗旱響應(yīng),以及利用floar-dip技術(shù)在擬南芥中異位超表達(dá)GhSPO11-3后,密切觀察GhSPO11-3超表達(dá)植株與野生型擬南芥植株生長發(fā)育和抗逆性的差異,并且進(jìn)一步揭示GhSPO11-3響應(yīng)脅迫的可能性機(jī)理。本研究為增強(qiáng)棉花抗逆性研究提供了有效的線索,具體結(jié)果如下:1.實(shí)時(shí)熒光定量法（qRT-PCR）鑒定GhSPO11-3在NaCl、Mannitol以及H₂O₂和ABA等不同脅迫處理下的表達(dá)量。結(jié)果顯示,GhSPO11-3受到這些脅迫的高度誘導(dǎo),表明GhSPO11-3極有可能參與了這些脅迫響應(yīng)。2.通過VIGS技... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

核內(nèi)周期與脅迫應(yīng)答通路圖（引自Scholes,D.R.,andPaige,K.N.（2015）.Plasticityinploidy:ageneralizedresponsetostress.TrendsinPlantScience20,165-175.）

圖 2.1 陸地棉 GhSPO11-3 A,D 基因組序列對比2 GhSPO11-3 基因表達(dá)模式的確定實(shí)時(shí)熒光定量的方法（qRT-PCR）來鑒定GhSPO11-3在不同脅迫下（NaCitol，ABA 和 H2O2）的表達(dá)水平。結(jié)果顯示 GhSPO11-3 受到這些脅迫導(dǎo)，尤其是在脅迫前期。對于 NaCl 處理，GhSPO11-3 在處理 2 小時(shí)急劇上調(diào)并且達(dá)到最高水平（基本達(dá)到 2.7 倍）（圖 2.2A）。同樣的，甘過氧化氫的處理也呈現(xiàn)相同的趨勢，也是在處理后 2 小時(shí)表達(dá)量達(dá)到別為 3 倍與 2 倍）（圖 2.2B，C）。而 ABA 處理的棉花子葉中呈現(xiàn)的誘強(qiáng)，在 2 小時(shí)表達(dá)量水平超過對照組的 4 倍，而在處理后 8 小時(shí)基本7 倍（圖 2.2 D）。

農(nóng)桿菌介導(dǎo)的 VIGS 沉默 GhSPO11-3 基因抗旱性分析農(nóng)桿菌注射大約兩周后，PTRV-GrCLA1 植株出現(xiàn)白化表型，代表系統(tǒng)已經(jīng)產(chǎn)生效應(yīng)（圖 2.3A）。提取 WT，PTRV-GFP， PTRV-GhSPO11-3 三種植株的總RNA 進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量以及半定量檢測沉默效率。半定量結(jié)果如圖 2.3B 所示，WT，TRV-00 PCR擴(kuò)增目的條帶產(chǎn)物均很亮，而TRV-01條帶相比較淺，且qPCR結(jié)果也證明 TRV-01 植株葉片 GhSPO11-3 有更低的表達(dá)量水平（圖 2.3C）。此結(jié)果說明 VIGS 系統(tǒng)成功抑制了 TRV-01 的表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]調(diào)虧灌溉對塑料大棚甜瓜光合特性、果實(shí)產(chǎn)量和品質(zhì)的影響[J]. 黃遠(yuǎn),王偉娟,汪力威,許全寶,孔秋生,別之龍.  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(01)
[2]病毒誘導(dǎo)的基因沉默[J]. 張花美,朱勝男,張麗莎,施曼玲.  杭州師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2011(02)
[3]鹽分脅迫對植物的影響及植物耐鹽機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 李彥,張英鵬,孫明,高弼模.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2008(01)
[4]水分脅迫下植物脯氨酸累積的分子機(jī)理[J]. 李玲,余光輝,曾富華.  華南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2003(01)
[5]農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)研究進(jìn)展[J]. 徐春暉,夏光敏,賀晨霞.  生命科學(xué). 2002(04)
[6]植物抗鹽堿、耐干旱基因工程研究進(jìn)展[J]. 江香梅,黃敏仁,王明庥.  南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2001(05)
[7]根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化研究的若干新進(jìn)展[J]. 李衛(wèi),郭光沁,鄭國锠.  科學(xué)通報(bào). 2000(08)

碩士論文
[1]陸地棉GhSPO11-3基因的克隆與功能分析[D]. 梅麗琴.鄭州大學(xué) 2017



本文編號：3227403