發(fā)布時間：2021-06-10 21:31

　　褐藻多酚是羊棲菜中含量較高的一類具有生物活性的天然產(chǎn)物,從結(jié)構(gòu)角度分析,盡管結(jié)構(gòu)種類多樣,但其僅由間苯三酚單體聚合而成。對長囊水云的研究表明,聚酮合酶基因是該單體生物合成途徑中的關(guān)鍵基因。同源搜索結(jié)果發(fā)現(xiàn),羊棲菜中存在一個聚酮合酶基因,與前者具有極高同源性;除此之外,羊棲菜中還存在著另外兩個聚酮合酶基因,但目前對它們的功能還不甚了解。本文從羊棲菜聚酮合酶的基因克隆、異源表達(dá)和酶學(xué)性質(zhì)分析三方面進(jìn)行探究:羊棲菜中存在3個聚酮合酶基因,分別是SfPKS1、SfPKS2和SfPKS3,克隆這三個基因后在大腸桿菌中進(jìn)行了異源表達(dá),并對純化后的重組蛋白進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)的研究。同源性分析羊棲菜的三個PKS基因表明:SfPKS2和SfPKS3具有較高的相似度,且與賓得馬尾藻SbPKS和水云EsiPKS1具有較高同源性;同時,SfPKS1、2和3的底物識別位點(diǎn)和催化活性位點(diǎn)的氨基酸序列高度保守。SfPKS的催化底物測試了兩種類型的CoA—直鏈烷基CoA和芳香類CoA,結(jié)果顯示SfPKS能以芳香類CoA作為反應(yīng)底物合成相應(yīng)的產(chǎn)物。對羊棲菜PKS的研究有助于進(jìn)一步挖掘羊棲菜中其他聚酮類化合物,為羊棲菜相關(guān)天... 

【文章來源】：溫州大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

多酚結(jié)構(gòu)式Fig.1-1Congstucionofpolyphenols

圖1-2 PKS的結(jié)構(gòu)域Fig.1-2 Domain orgnization of PKSsA: type I PKS (modular type)，B: type I PKS (iterative type)，C: type II PKS，D: type IS結(jié)構(gòu)域包括�；D(zhuǎn)移酶（Acyltransferase，AT），酮縮酶（Ketos酮還原酶（Ketoreductase，KR），脫水酶（Dehydratase，DH）noylreductase，ER），�；D(zhuǎn)移蛋白（Acy Carrier Protein，Ahioseterase，TE）[110]。AT和KS結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)聚酮類化合物鏈的化反應(yīng)過程中，每一次延伸單元的疊加都會有AT的參與[111]，構(gòu)域，KS結(jié)構(gòu)中的乙�；Y(jié)合區(qū)域決定I型和II型PKS催化產(chǎn)、DH、ER結(jié)構(gòu)域主要負(fù)責(zé)產(chǎn)物鏈的修飾作用，KR修飾多肽羰 則催化多肽脫水，在α和β碳間形成雙鍵，ER結(jié)構(gòu)域還原α,β烯，TE結(jié)構(gòu)域在多肽合成的最后催化脫水或環(huán)化，ACP是一個120 AA），負(fù)責(zé)產(chǎn)物在酶激活位點(diǎn)間的傳遞，I型和II型的P。圖1-3繪制了 PKS 結(jié)構(gòu)域標(biāo)準(zhǔn)催化鏈的延伸和修飾[110]。

圖1-2 PKS的結(jié)構(gòu)域Fig.1-2 Domain orgnization of PKSsA: type I PKS (modular type)，B: type I PKS (iterative type)，C: type II PKS，D: type III PKSPKS結(jié)構(gòu)域包括�；D(zhuǎn)移酶（Acyltransferase，AT），酮縮酶（Ketosynthase，KS），酮還原酶（Ketoreductase，KR），脫水酶（Dehydratase，DH），烯酰還原酶（Enoylreductase，ER），�；D(zhuǎn)移蛋白（Acy Carrier Protein，ACP），硫酯酶（Thioseterase，TE）[110]。AT和KS結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)聚酮類化合物鏈的延長，在I型PKS催化反應(yīng)過程中，每一次延伸單元的疊加都會有AT的參與[111]，KS是PKS的必須結(jié)構(gòu)域，KS結(jié)構(gòu)中的乙�；Y(jié)合區(qū)域決定I型和II型PKS催化產(chǎn)物的長度[110]。KR、DH、ER結(jié)構(gòu)域主要負(fù)責(zé)產(chǎn)物鏈的修飾作用，KR修飾多肽羰基的還原[112]，DH 則催化多肽脫水，在α和β碳間形成雙鍵，ER結(jié)構(gòu)域還原α,β烯�；娠柡挺�，β鍵，TE結(jié)構(gòu)域在多肽合成的最后催化脫水或環(huán)化，ACP是一個小分子蛋白（60～120 AA），負(fù)責(zé)產(chǎn)物在酶激活位點(diǎn)間的傳遞，I型和II型的PKS都含有ACP[113]。圖1-3繪制了 PKS 結(jié)構(gòu)域標(biāo)準(zhǔn)催化鏈的延伸和修飾[110]。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]羊棲菜蛋白質(zhì)提取及功能性研究[J]. 龐庭才,胡上英,范和良,黃海,林麗丹.  中國釀造. 2017(09)
[2]海洋褐藻羊棲菜（Sargassum fusiforme）中馬尾藻甾醇、巖藻甾醇的分類純化及抗菌、抗氧化活性研究[J]. 孫瑜,丁國芳,徐銀峰.  海洋與湖沼. 2017(03)
[3]羊棲菜非多糖成分及其藥理活性研究進(jìn)展[J]. 秦華夏,廖志勇.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(08)
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[6]正交試驗(yàn)法優(yōu)化酶輔助提取羊棲菜多酚工藝[J]. 曾帥,周德慶,劉楠.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2016(09)
[7]對香豆酰輔酶A酯生物合成及純化方法[J]. 潘琛,任百光,蓋穎.  北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2016(03)
[8]羊棲菜成分以及藥理研究進(jìn)展[J]. 王百龍,孫稚穎,周鳳琴.  山東中醫(yī)雜志. 2015(09)
[9]羊棲菜多酚提取工藝優(yōu)化[J]. 何傳輝,何傳波,魏好程,王姣,熊何健.  食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報. 2015(08)
[10]羊棲菜活性多糖的提取與生物活性研究進(jìn)展[J]. 丁浩淼,謝作亮,謝琰,汪財生,顧筱筱,錢國英.  藥物生物技術(shù). 2015(04)

碩士論文
[1]羊棲菜多糖的提取分離、生物活性及結(jié)構(gòu)鑒定[D]. 劉洪超.上海海洋大學(xué) 2017
[2]羊棲菜多糖的化學(xué)修飾及生物活性研究[D]. 陳冰潔.浙江工商大學(xué) 2017
[3]羊棲菜中萜類成分的提取與純化方法研究[D]. 徐忠明.浙江工商大學(xué) 2015
[4]不同品系羊棲菜形態(tài)和營養(yǎng)成分的初步分析[D]. 崔海峰.東北林業(yè)大學(xué) 2013
[5]羊棲菜多糖的提取和純化研究[D]. 周峙苗.浙江工業(yè)大學(xué) 2004
[6]馬尾藻多糖與多酚的提取及其活性研究[D]. 周貞兵.廣西大學(xué) 2002



本文編號：3223156