紫花苜蓿MsHB7基因的克隆及功能分析
發(fā)布時間：2021-06-09 00:18
植物的生長和發(fā)育受到各種非生物脅迫因素的影響。干旱和鹽脅迫下,植物的生長和生理功能會被影響。轉(zhuǎn)錄因子在植物對環(huán)境的適應方面起著重要的作用。其中,HD-Zip第I類亞家族主要參與植物對非生物脅迫的響應。本研究旨在從紫花苜蓿中克隆得到HD-Zip第I類亞家族基因MsHB7基因,并將其轉(zhuǎn)入擬南芥和紫花苜蓿中,研究該基因的功能。主要研究結(jié)果如下:1.MsHB7基因的克隆與生物信息學分析通過同源克隆,獲得了紫花苜蓿MsHB7基因,該基因編碼245個氨基酸,并含有兩個保守結(jié)構(gòu)域:同源異形域和亮氨酸拉鏈。系統(tǒng)進化樹分析表明MsHB7為HD-Zip I亞類轉(zhuǎn)錄因子。2.MsHB7基因的組織特異性表達對紫花苜蓿根、莖、葉和花組織中MsHB7基因的表達水平進行了檢測,發(fā)現(xiàn)MsHB7基因在不同組織中均有表達,且在花中的表達量最高。3.MsHB7的亞細胞定位通過構(gòu)建MsHB7基因的亞細胞定位載體,使MsHB7基因與GFP蛋白在煙草細胞中融合表達,結(jié)果表明MsHB7蛋白定位在細胞核上。4.MsHB7基因?qū)M南芥和紫花苜蓿的遺傳轉(zhuǎn)化構(gòu)建植物超表達載體pBI121-MsHB7,分別轉(zhuǎn)化擬南芥和紫花苜蓿,成功獲得轉(zhuǎn)基...
【文章來源】：哈爾濱師范大學黑龍江省
【文章頁數(shù)】：63 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
HD-ZipI–IV亞類家族的結(jié)構(gòu)特征[9]
哈爾濱師范大學碩士學位論文1260℃1min95℃15s其中最后一步為擴增產(chǎn)物的溶解曲線分析。定量結(jié)果采用2-ΔΔCT法（Livak）計算基因的相對表達量。2.5實驗結(jié)果2.5.1MsHB7基因的克隆根據(jù)NCBI已知的蒺藜苜蓿中相關(guān)基因的序列設計引物，以反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，對目的基因克隆之后，進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，獲得一條750bp左右的條帶。與目標序列大小一致（圖2-1）。M：DNAmarker圖2-1MsHB7基因的PCR產(chǎn)物Fig.2-1PCRpruductofMsHB7gene2.5.2生物信息學分析對獲得的MsHB7基因序列進行生物信息學分析，該基因包含一個738bp的開放閱讀框，可編碼245個氨基酸，蛋白質(zhì)的分子量為29.02kDa，理論等電點5.33，包含兩個結(jié)構(gòu)域：同源異形域（41-91）和亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域（93-131）。MsHB7基因核苷酸序列如下：
哈爾濱師范大學碩士學位論文14I-IV分別為擬南芥中四類亞家族HD-Zip蛋白I-IVarefoursubfamilyofHD-ZipproteinsinArabidopsisthaliana圖2-2MsHB7與擬南芥中一些同源異型域-亮氨酸拉鏈蛋白進化樹分析Fig.2-2PhylogenetictreeanalysisofMsHB7andsomehomeodomain-leucinezipperproteinfromArabidopsisthaliana用于多重序列比對的HD-ZipI類亞家族蛋白信息如下：蒺藜苜蓿MedicagotruncatulaATHB-12XP_003602321.2；鷹嘴豆CicerarietinumATHB-12-likeXP_004502719.1；小豆VignaangularisATHB-12-likeXP_017420762.1；陸地棉GossypiumhirsutumATHB-12-likeXP_016695089.1；核桃JuglansregiaATHB-12-likeXP_018842791.1；毛果楊PopulustrichocarpaATHB-7XP_002320889.1；巨桉EucalyptusgrandisATHB-12-likeXP_018729630.1；桃樹PrunuspersicaATHB-12XP_007218213.1；麻瘋樹JatrophacurcasATHB-12XP_012088620.1；蘋果MalusdomesticaATHB-12-likeNP_001281285.1；辣椒CapsicumannuumATHB-12-likeXP_016538252.1；煙草NicotianatabacumATHB-12-likeNP_001311821.1；橙CitrussinensisATHB-7XP_006491341.1；大豆GlycinemaxATHB-12XP_003548207.2；番茄SolanumlycopersicumATHB-12XP_004230017.1；擬南芥ArabidopsisthalianaATHB-12NP_191748.1。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]葉片相對含水量的活體測定[J]. 張慧,汪沛洪. 植物生理學通訊. 1991(03)
碩士論文
[1]濕地植物耐旱能力與機制的研究[D]. 徐星.華中師范大學 2016
[2]紫花苜蓿鹽誘導HD-Zip類轉(zhuǎn)錄因子MsHB2的克隆及功能分析[D]. 李明娜.南京農(nóng)業(yè)大學 2014
本文編號：3219512
【文章來源】：哈爾濱師范大學黑龍江省
【文章頁數(shù)】：63 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
HD-ZipI–IV亞類家族的結(jié)構(gòu)特征[9]
哈爾濱師范大學碩士學位論文1260℃1min95℃15s其中最后一步為擴增產(chǎn)物的溶解曲線分析。定量結(jié)果采用2-ΔΔCT法（Livak）計算基因的相對表達量。2.5實驗結(jié)果2.5.1MsHB7基因的克隆根據(jù)NCBI已知的蒺藜苜蓿中相關(guān)基因的序列設計引物，以反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，對目的基因克隆之后，進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，獲得一條750bp左右的條帶。與目標序列大小一致（圖2-1）。M：DNAmarker圖2-1MsHB7基因的PCR產(chǎn)物Fig.2-1PCRpruductofMsHB7gene2.5.2生物信息學分析對獲得的MsHB7基因序列進行生物信息學分析，該基因包含一個738bp的開放閱讀框，可編碼245個氨基酸，蛋白質(zhì)的分子量為29.02kDa，理論等電點5.33，包含兩個結(jié)構(gòu)域：同源異形域（41-91）和亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域（93-131）。MsHB7基因核苷酸序列如下：
哈爾濱師范大學碩士學位論文14I-IV分別為擬南芥中四類亞家族HD-Zip蛋白I-IVarefoursubfamilyofHD-ZipproteinsinArabidopsisthaliana圖2-2MsHB7與擬南芥中一些同源異型域-亮氨酸拉鏈蛋白進化樹分析Fig.2-2PhylogenetictreeanalysisofMsHB7andsomehomeodomain-leucinezipperproteinfromArabidopsisthaliana用于多重序列比對的HD-ZipI類亞家族蛋白信息如下：蒺藜苜蓿MedicagotruncatulaATHB-12XP_003602321.2；鷹嘴豆CicerarietinumATHB-12-likeXP_004502719.1；小豆VignaangularisATHB-12-likeXP_017420762.1；陸地棉GossypiumhirsutumATHB-12-likeXP_016695089.1；核桃JuglansregiaATHB-12-likeXP_018842791.1；毛果楊PopulustrichocarpaATHB-7XP_002320889.1；巨桉EucalyptusgrandisATHB-12-likeXP_018729630.1；桃樹PrunuspersicaATHB-12XP_007218213.1；麻瘋樹JatrophacurcasATHB-12XP_012088620.1；蘋果MalusdomesticaATHB-12-likeNP_001281285.1；辣椒CapsicumannuumATHB-12-likeXP_016538252.1；煙草NicotianatabacumATHB-12-likeNP_001311821.1；橙CitrussinensisATHB-7XP_006491341.1；大豆GlycinemaxATHB-12XP_003548207.2；番茄SolanumlycopersicumATHB-12XP_004230017.1；擬南芥ArabidopsisthalianaATHB-12NP_191748.1。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]葉片相對含水量的活體測定[J]. 張慧,汪沛洪. 植物生理學通訊. 1991(03)
碩士論文
[1]濕地植物耐旱能力與機制的研究[D]. 徐星.華中師范大學 2016
[2]紫花苜蓿鹽誘導HD-Zip類轉(zhuǎn)錄因子MsHB2的克隆及功能分析[D]. 李明娜.南京農(nóng)業(yè)大學 2014
本文編號：3219512
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