植物的生長(zhǎng)和發(fā)育受到各種非生物脅迫因素的影響。干旱和鹽脅迫下,植物的生長(zhǎng)和生理功能會(huì)被影響。轉(zhuǎn)錄因子在植物對(duì)環(huán)境的適應(yīng)方面起著重要的作用。其中,HD-Zip第I類(lèi)亞家族主要參與植物對(duì)非生物脅迫的響應(yīng)。本研究旨在從紫花苜蓿中克隆得到HD-Zip第I類(lèi)亞家族基因MsHB7基因,并將其轉(zhuǎn)入擬南芥和紫花苜蓿中,研究該基因的功能。主要研究結(jié)果如下:1.MsHB7基因的克隆與生物信息學(xué)分析通過(guò)同源克隆,獲得了紫花苜蓿MsHB7基因,該基因編碼245個(gè)氨基酸,并含有兩個(gè)保守結(jié)構(gòu)域:同源異形域和亮氨酸拉鏈。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明MsHB7為HD-Zip I亞類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子。2.MsHB7基因的組織特異性表達(dá)對(duì)紫花苜蓿根、莖、葉和花組織中MsHB7基因的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè),發(fā)現(xiàn)MsHB7基因在不同組織中均有表達(dá),且在花中的表達(dá)量最高。3.MsHB7的亞細(xì)胞定位通過(guò)構(gòu)建MsHB7基因的亞細(xì)胞定位載體,使MsHB7基因與GFP蛋白在煙草細(xì)胞中融合表達(dá),結(jié)果表明MsHB7蛋白定位在細(xì)胞核上。4.MsHB7基因?qū)M南芥和紫花苜蓿的遺傳轉(zhuǎn)化構(gòu)建植物超表達(dá)載體pBI121-MsHB7,分別轉(zhuǎn)化擬南芥和紫花苜蓿,成功獲得轉(zhuǎn)基... 

【文章來(lái)源】：哈爾濱師范大學(xué)黑龍江省

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HD-ZipI–IV亞類(lèi)家族的結(jié)構(gòu)特征[9]

哈爾濱師范大學(xué)碩士學(xué)位論文1260℃1min95℃15s其中最后一步為擴(kuò)增產(chǎn)物的溶解曲線(xiàn)分析。定量結(jié)果采用2-ΔΔCT法（Livak）計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量。2.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.5.1MsHB7基因的克隆根據(jù)NCBI已知的蒺藜苜蓿中相關(guān)基因的序列設(shè)計(jì)引物，以反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，對(duì)目的基因克隆之后，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，獲得一條750bp左右的條帶。與目標(biāo)序列大小一致（圖2-1）。M：DNAmarker圖2-1MsHB7基因的PCR產(chǎn)物Fig.2-1PCRpruductofMsHB7gene2.5.2生物信息學(xué)分析對(duì)獲得的MsHB7基因序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，該基因包含一個(gè)738bp的開(kāi)放閱讀框，可編碼245個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)的分子量為29.02kDa，理論等電點(diǎn)5.33，包含兩個(gè)結(jié)構(gòu)域：同源異形域（41-91）和亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域（93-131）。MsHB7基因核苷酸序列如下：

哈爾濱師范大學(xué)碩士學(xué)位論文14I-IV分別為擬南芥中四類(lèi)亞家族HD-Zip蛋白I-IVarefoursubfamilyofHD-ZipproteinsinArabidopsisthaliana圖2-2MsHB7與擬南芥中一些同源異型域-亮氨酸拉鏈蛋白進(jìn)化樹(shù)分析Fig.2-2PhylogenetictreeanalysisofMsHB7andsomehomeodomain-leucinezipperproteinfromArabidopsisthaliana用于多重序列比對(duì)的HD-ZipI類(lèi)亞家族蛋白信息如下：蒺藜苜蓿MedicagotruncatulaATHB-12XP_003602321.2；鷹嘴豆CicerarietinumATHB-12-likeXP_004502719.1；小豆VignaangularisATHB-12-likeXP_017420762.1；陸地棉GossypiumhirsutumATHB-12-likeXP_016695089.1；核桃JuglansregiaATHB-12-likeXP_018842791.1；毛果楊PopulustrichocarpaATHB-7XP_002320889.1；巨桉EucalyptusgrandisATHB-12-likeXP_018729630.1；桃樹(shù)PrunuspersicaATHB-12XP_007218213.1；麻瘋樹(shù)JatrophacurcasATHB-12XP_012088620.1；蘋(píng)果MalusdomesticaATHB-12-likeNP_001281285.1；辣椒CapsicumannuumATHB-12-likeXP_016538252.1；煙草NicotianatabacumATHB-12-likeNP_001311821.1；橙CitrussinensisATHB-7XP_006491341.1；大豆GlycinemaxATHB-12XP_003548207.2；番茄SolanumlycopersicumATHB-12XP_004230017.1；擬南芥ArabidopsisthalianaATHB-12NP_191748.1。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]葉片相對(duì)含水量的活體測(cè)定[J]. 張慧,汪沛洪.  植物生理學(xué)通訊. 1991(03)

碩士論文
[1]濕地植物耐旱能力與機(jī)制的研究[D]. 徐星.華中師范大學(xué) 2016
[2]紫花苜蓿鹽誘導(dǎo)HD-Zip類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子MsHB2的克隆及功能分析[D]. 李明娜.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3219512