目的:探討沉默c-fos基因?qū)M_2.5染毒人支氣管上皮細(xì)胞（HBE細(xì)胞）癌基因和凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響。方法:采用RNA干擾技術(shù),根據(jù)GenBank提供的c-fos mRNA序列,設(shè)計(jì)合成shRNA干擾序列,將重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染HBE細(xì)胞,構(gòu)建c-fos基因沉默細(xì)胞株。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）和Western blot對c-fos基因沉默效果進(jìn)行鑒定。以HBE細(xì)胞、c-fos基因沉默細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對象,用濃度為50μg/mL的PM_2.5混懸液染毒24 h,同時(shí)設(shè)立陰性對照組,qPCR和Western blot分別檢測部分癌基因c-myc、k-ras、c-fos、p53和凋亡相關(guān)基因Caspase-3、Caspase-8在mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。結(jié)果:轉(zhuǎn)染c-fos-shRNA慢病毒的HBE細(xì)胞中,經(jīng)qPCR和Western blot檢測發(fā)現(xiàn),與對照組HBE細(xì)胞相比,c-fos m RNA表達(dá)水平下降70.1%,c-fos蛋白表達(dá)水平下降53.7%。PM_2.5染毒HBE細(xì)胞后,與未染毒的對照組比較,c-my... 

【文章來源】：癌變·畸變·突變. 2020,32(04)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

PM2.5染毒HBE細(xì)胞和c-fos基因沉默細(xì)胞后凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平變化

Western blot檢測c-fos蛋白表達(dá)水平結(jié)果見圖2,與HBE正常細(xì)胞比較，轉(zhuǎn)染干擾序列shRNAc細(xì)胞中c-fos蛋白相對表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，c-fos基因沉默細(xì)胞中c-fos蛋白表達(dá)降低53.7%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，表明c-fos基因沉默細(xì)胞株構(gòu)建成功。圖2 Western blot檢測c-fos基因沉默細(xì)胞中c-fos蛋白表達(dá)水平

圖1 qPCR檢測c-fos基因沉默細(xì)胞中c-fos m RNA表達(dá)水平2.3 HBE細(xì)胞c-fos基因沉默前后PM2.5對癌基因及凋亡相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PM2.5對支氣管上皮細(xì)胞DNA損傷作用研究[J]. 王冰玉,鄭凱,徐新云,謝紅衛(wèi),于軍暉,龍鼎新.  癌變·畸變·突變. 2019(06)
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本文編號：3217549