氨基酸通透酶（AAP）在植物吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸的過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。擬南芥AtAAP1是植物中發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,在水稻、玉米、馬鈴薯、豌豆、蠶豆、菜豆等農(nóng)作物中也有較多報(bào)道。目前,關(guān)于大豆GmAAP的研究卻較為少見,AAP能提高豆科植物對(duì)外源氮的吸收與利用率,增加種子內(nèi)貯藏蛋白含量,進(jìn)而提升大豆品質(zhì)。本研究從大豆中成功克隆出GmAAP基因,對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析和亞細(xì)胞定位,明確該基因行使功能的區(qū)域;同時(shí)分別在大豆和轉(zhuǎn)基因擬南芥中對(duì)該基因的表達(dá)模式進(jìn)行研究;通過(guò)20種編碼氨基酸親和試驗(yàn),結(jié)合轉(zhuǎn)GmAAP基因擬南芥種子中20種編碼氨基酸含量的試驗(yàn)結(jié)果,明確GmAAP蛋白對(duì)氨基酸的吸收特性;通過(guò)單一氨基酸培養(yǎng)試驗(yàn),測(cè)定轉(zhuǎn)基因大豆發(fā)根GmAAP基因表達(dá)和氮代謝關(guān)鍵酶活性,旨在解析GmAAP基因與氮代謝的關(guān)系。試驗(yàn)結(jié)果可為GmAAP功能的研究奠定基礎(chǔ),同時(shí)也為大豆氮素的高效利用提供候選基因。主要結(jié)果如下:1.以大豆Williams 82為試驗(yàn)材料,通過(guò)RT-PCR同源克隆到GmAAP基因,其開放閱讀框長(zhǎng)度為1440 bp,編碼479個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析表明,GmAAP蛋白分子... 

【文章來(lái)源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

大豆葉片總RNA電泳結(jié)果

將亮帶切膠回收后與 pCAMBIA3301-GFP 載體連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌 DH挑取的單菌落擴(kuò)繁，經(jīng)菌液 PCR 驗(yàn)證得到的陽(yáng)性克�。▓D 2.3）測(cè)序后與 phytozo2.1 數(shù)據(jù)庫(kù)中的 GmAAP 序列比對(duì)，結(jié)果表明成功克隆到長(zhǎng)度為 1440 bp 的 GmAAP，并完成了表達(dá)載體 pCAMBIA3301-GFP-GmAAP 的構(gòu)建。

將亮帶切膠回收后與 pCAMBIA3301-GFP 載體連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌 DH挑取的單菌落擴(kuò)繁，經(jīng)菌液 PCR 驗(yàn)證得到的陽(yáng)性克�。▓D 2.3）測(cè)序后與 phytozo2.1 數(shù)據(jù)庫(kù)中的 GmAAP 序列比對(duì)，結(jié)果表明成功克隆到長(zhǎng)度為 1440 bp 的 GmAAP，并完成了表達(dá)載體 pCAMBIA3301-GFP-GmAAP 的構(gòu)建。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Overexpression of GmProT1 and GmProT2 increases tolerance to drought and salt stresses in transgenic Arabidopsis[J]. GUO Na,XUE Dong,ZHANG Wei,ZHAO Jin-ming,XUE Chen-chen,YAN Qiang,XUE Jin-yan,WANG Hai-tang,ZHANG Yu-mei,XING Han.  Journal of Integrative Agriculture. 2016(08)
[2]大豆氨基酸透性酶基因GmAAP2-like 1的克隆及功能初探[J]. 李美美,夏銅梅,王丹,梅圓圓,王寧寧.  植物生理學(xué)報(bào). 2016(01)
[3]菲與NH4+-N和NO3--N共存對(duì)作物根系硝酸還原酶活性的影響[J]. 袁嘉韓,易修,顧鎖娣,占新華,周立祥,徐仁扣.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(01)
[4]北方地區(qū)大豆根瘤菌的生物學(xué)特性[J]. 劉靈芝,陳玉玲,陳志剛,姜亮,呂曉鋒.  土壤通報(bào). 2007(01)
[5]高等植物中的谷氨酸脫氫酶及其生理作用[J]. 黃國(guó)存,田波.  植物學(xué)通報(bào). 2001(04)



本文編號(hào)：3216366