目的泡狀棘球蚴病是一種浸潤(rùn)性生長(zhǎng)為主的人獸共患疾病,大多數(shù)原發(fā)于肝臟,有“蟲癌”之稱。目前對(duì)其遷徙和轉(zhuǎn)移機(jī)制尚不明確。有研究發(fā)現(xiàn)骨橋蛋白（OPN）可以促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞遷徙和轉(zhuǎn)移。通過對(duì)泡球蚴OPN基因進(jìn)行克隆并對(duì)其生物信息學(xué)進(jìn)行分析,為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。方法取感染多房棘球蚴的長(zhǎng)爪沙鼠提取泡球蚴原頭節(jié),提取泡球蚴總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,從NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)中通過BLAST找到可能的OPN基因保守序列片段（EMmg-13d08.q1k）通過軟件設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增目的基因測(cè)序與多房棘球蚴OPN基因同源性片段再次上傳至NCBI進(jìn)行比對(duì),應(yīng)用RACE方法進(jìn)行3’-RACE PCR利用引物合成3’-RACE cDNA第一鏈,以3’-RACE cDNA為模板進(jìn)行巢氏PCR反應(yīng),5’-RACE PCR合成5’-RACE cDNA第一鏈,得到5’-RACE cDNA純化進(jìn)行巢氏PCR反應(yīng)。軟件對(duì)泡球蚴OPN基因保守序列、3’-RACE測(cè)序序列、5’-RACE測(cè)序序列進(jìn)行校正拼接得到泡球蚴OPN基因全長(zhǎng)序列。推測(cè)OPN開放閱讀框（ORF）所對(duì)應(yīng)的氨基酸序列,進(jìn)行蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)及抗原位表位... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：47 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

多房棘球絳蟲與寄主飼養(yǎng)細(xì)胞共培養(yǎng)的建立（SpiliotisM等，2009）

泡狀棘球蚴骨橋蛋白基因的克隆和生物信息學(xué)分析6圖1多房棘球絳蟲與寄主飼養(yǎng)細(xì)胞共培養(yǎng)的建立（SpiliotisM等，2009）Fig1FlowchartsummarizingthesetupofE.multilocularismetacestodeco-cultureswithhostfeedercells(FromSpiliotisMet,al2009)b.制備無宿主細(xì)胞培養(yǎng)液，按照a步驟培養(yǎng)Hela細(xì)胞，一周后離心取上清液，每毫升上清液加入1μLβ-巰基乙醇、1μL浴銅靈二磺酸、1μLL-半胱氨酸和雙抗。放置-80℃保存?zhèn)溆谩Ｅ囵B(yǎng)3月后的小囊泡加入無宿主細(xì)胞培養(yǎng)液放入75cm2培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)瓶中充進(jìn)氮?dú)猓饪�。放�?7°Ｃ培養(yǎng)箱。每2-3天更換無宿主細(xì)胞培養(yǎng)液，連續(xù)培養(yǎng)3月，觀察囊泡生長(zhǎng)情況。流程圖如圖（2）。圖2無宿主細(xì)胞的多房棘球絳蟲培養(yǎng)體系的建立（SpiliotisM等，2009）Fig2FlowchartsummarizingsetupofE.multilocularismetacestodesinaxenic(host-cellfree)culture.(FromSpiliotisMet,al2009)

泡球蚴總RNA提取Fig.1TheelectrophoreticbandsoftotalRNAfromEchinococcusmultilocularis

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3216287