本實(shí)驗(yàn)室前期,以HL-CMS不育系YTA為材料,克隆并鑒定了一個(gè)6.7 kb的HL-CMS相關(guān)線粒體序列HL-sp1,根據(jù)序列預(yù)測(cè)含2個(gè)orfs,其中一個(gè)編碼290個(gè)氨基酸,暫命名為orf290。本文以構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因水稻超表達(dá)orf290對(duì)育性的影響,分析了水稻線粒體基因orf290的功能,主要結(jié)果如下:1.利用YTA為材料克隆得到目的基因orf290,以MH63基因組DNA為模板利用巢式PCR擴(kuò)增得到線粒體信號(hào)肽Rf1b5’,利用植物雙元表達(dá)載體pCAMBIA1305.1構(gòu)建了含有線粒體信號(hào)肽（35S::Rf1b5’::orf290）和不含線粒體信號(hào)肽（35S::orf290）的超表達(dá)載體,以YTB為受體,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)完成遺傳轉(zhuǎn)化,獲得超表達(dá)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株。2.以YTA和YTB分別為陰性及陽(yáng)性對(duì)照,對(duì)35S::Rf1b5’::orf290轉(zhuǎn)基因植株花粉可育度和套袋結(jié)實(shí)率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果表明除個(gè)別植株花粉可育度幾乎為0外,所有其它轉(zhuǎn)基因植株花粉可育度均在30%以下,套袋結(jié)實(shí)率在50%左右。實(shí)驗(yàn)證實(shí)線粒體基因orf290與水稻細(xì)胞質(zhì)雄性不育相關(guān)。3.以水稻的單拷貝基因蔗糖磷酸合成酶基因... 

【文章來(lái)源】：中南民族大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pCAMBIA1305.1載體結(jié)構(gòu)（引自Http://www.cambia.org）

方式檢測(cè) orf290 的表達(dá)量，每個(gè)樣品設(shè)置 3 個(gè)重復(fù)果與分析線粒體基因 orf290 的克隆 gDNA 為模板，PCR 擴(kuò)增線粒體基因 orf290 的全了 2 個(gè)帶有不同酶切位點(diǎn)的質(zhì)粒，分別為 pMD18-T90 BglⅡ，預(yù)期大小都為 873bp，圖 2.1、2.2 的結(jié)果的陽(yáng)性菌落送公司測(cè)序，并將測(cè)序正確的進(jìn)行保菌

gDNA 為模板，PCR 擴(kuò)增線粒體基因 orf290 的全了 2 個(gè)帶有不同酶切位點(diǎn)的質(zhì)粒，分別為 pMD18-T90 BglⅡ，預(yù)期大小都為 873bp，圖 2.1、2.2 的結(jié)果的陽(yáng)性菌落送公司測(cè)序，并將測(cè)序正確的進(jìn)行保菌圖 2.1 pMD18-T- orf290 NcoⅠ載體質(zhì)粒 PCR 鑒定M：DL2000 ； 1-6：不同的單克隆e identification of recombinant plasmids pMD18-T-orf290NcoM: DL2000; 1-6: different clones

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高等植物線粒體基因組測(cè)序和序列分析[J]. 李雙雙,薛龍飛,蘇愛(ài)國(guó),雷彬彬,王玉美,華金平.  中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(02)
[2]植物細(xì)胞質(zhì)雄性不育分子機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 凌杏元,周培疆,朱英國(guó).  植物學(xué)通報(bào). 2000(04)



本文編號(hào)：3215938