隨著人類對海產(chǎn)品需求量的增大,海水養(yǎng)殖發(fā)展不斷加速,而伴隨著經(jīng)濟的發(fā)展,沿海工業(yè)化也愈發(fā)迅速,導致海水養(yǎng)殖環(huán)境不斷惡化,而近海水域的生態(tài)環(huán)境對貝類養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟發(fā)展至關重要。因此,研究海洋貝類的免疫生物學機制將為其健康養(yǎng)殖提供重要理論依據(jù)。厚殼貽貝（Mytilus coruscus）作為濾食性動物,分布廣泛,生長能力強,但活動能力差,在日常環(huán)境中廣泛接觸海洋環(huán)境中各種病原微生物,但由此引發(fā)的疾病感染并不多見,說明其體內存在較強的抗菌感染機制,因此研究厚殼貽貝的天然免疫防御機制將為其健康養(yǎng)殖提供重要理論參考。白細胞介素1受體相關激酶（IRAKs）是Toll樣受體（TLR）介導的信號通路的重要接頭分子,在生物的天然免疫系統(tǒng)中起重要作用。因此,本論文對厚殼貽貝TLR信號通路中的免疫因子IRAK進行了鑒定、系統(tǒng)進化分析及相關表達機制和體外蛋白表達研究,主要取得的研究結果如下:1.本文基于厚殼貽貝轉錄組數(shù)據(jù),獲得了白細胞介素1受體相關激酶a（命名為McIRAK-a,GenBank登錄號:MK592614）和b（命名為McIRAK-b,GenBank登錄號:MK592615）的cDNA全長序列,McI... 

【文章來源】：浙江海洋大學浙江省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

厚殼貽貝鰓組織RNA凝膠電泳圖

第二章厚殼貽貝IRAK-a基因克隆與序列分析192.3結果與討論2.3.1RNA提取結果實驗通過Trizol法成功提取厚殼貽貝的鰓組織得RNA，將獲得的RNA進行瓊脂糖凝膠電泳用紫外凝膠成像系統(tǒng)分析條帶。如圖2-1，28SrRNA、18SrRNA和5SrRNA條帶都很明顯，微量核酸蛋白檢測儀對總RNA濃度和質量的檢測顯示，OD260/280比值均處于1.8-2.1之間，OD260/230處在2.0-2.4之間，提示此法適用于厚殼貽貝總RNA的提取，并可以用于cDNA第一鏈合成。圖2-1厚殼貽貝鰓組織RNA凝膠電泳圖Fig2.1ResultsofelectrophoreticdetectionofRNAfromgillstissueofM.coruscus2.3.2McIRAK-a核心片段擴增結果以McIRAK-a核心片段設計的引物進行溫度梯度PCR擴增，所得目的片段約700bp，符合預期設計片段大小，割膠回收后，送公司測序，并將送測結果在NCBI數(shù)據(jù)庫中比對，結果顯示為目標序列（圖2-2）。圖2-2McIRAK-a核心片段PCR產(chǎn)物注：M表示DNAMarkerDL1000Fig2.2McIRAK-acorefragmentPCRproductNote:MmeansDNAMarkerDL1000

第二章厚殼貽貝IRAK-a基因克隆與序列分析21圖2-3A厚殼貽貝IRAK-a的全長序列分析注：起始密碼子ATG用黑色線框表示，終止密碼子TAA用星號*表示。下劃線標注的為IRAK-a結構域�；疑珔^(qū)域表示蛋白激酶ATP結合位點和絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的活性位點。綠色，藍色和黃色分別表示絲氨酸位點，酪氨酸位點和蘇氨酸位點。Fig2.3AFull-lengthsequenceanalysisofIRAK-ainM.coruscusNote:ThestartcodonATGisindicatedbyablackwireframe,andthestopcodonTAAisindicatedbyanasterisk*.TheIRAK-adomainisunderlined.ThegrayareaindicatestheproteinkinaseATPbindingsiteandtheactivesiteofserine/threonineproteinkinase.Green,blueandyellowindicateserine,tyrosineandthreoninesites,respectively.

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3208665