CRISPR/Cas9技術(shù)是由細(xì)菌、古細(xì)菌的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)CRISPR/Cas系統(tǒng)改造而來的基因編輯技術(shù),該技術(shù)一經(jīng)問世就沖擊到了生命科學(xué)研究的各個領(lǐng)域。CRISPR/Cas9技術(shù)依賴于sgRNA和Cas9對靶基因進(jìn)行編輯,操作簡便、實驗周期短、應(yīng)用廣泛。掌握CRISPR/Cas9技術(shù)能夠為以后的科學(xué)研究提供高效有力的工具。NLRP3炎癥小體是免疫系統(tǒng)的重要組成成分,除了與炎癥疾病有關(guān),也有研究顯示NLRP3炎癥小體影響癌癥的發(fā)生、發(fā)展。已經(jīng)有研究利用RNAi技術(shù)證明NLRP3炎癥小體與乳腺癌的增殖,侵襲和轉(zhuǎn)移有著相關(guān)性,但是由于RNAi技術(shù)本身的局限性,NLRP3炎癥小體與乳腺癌相關(guān)性的機(jī)制還沒有被闡述清楚。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建NLRP3基因穩(wěn)定敲除的MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞株,為以后研究NLRP3炎癥小體與MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞生長、增殖的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。HEK-293T細(xì)胞是常用的工具細(xì)胞,在構(gòu)建NLRP3基因敲除的乳腺癌細(xì)胞株的同時,構(gòu)建NLRP3基因敲除的HEK-293T細(xì)胞株,以期能夠深入研究CRISPR/Cas9技術(shù)的操作要... 

【文章來源】：山東師范大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞中英文對照表
第一章 綜述
    1 基因編輯技術(shù)發(fā)展歷史
    2 CRISPR/Cas技術(shù)的結(jié)構(gòu)與機(jī)制
    3 CRISPR/Cas系統(tǒng)的分類
    4 CRISPR/Cas9 技術(shù)的應(yīng)用
    5 CRISPR/Cas9 技術(shù)面臨的問題和挑戰(zhàn)
    6 NLRP3 炎癥小體
    7 MDA-MB-231 細(xì)胞、MCF-7 細(xì)胞和HEK-293T細(xì)胞簡述
    8 本論文選題的依據(jù)及意義
第二章 材料與方法
    1 材料
        1.1 細(xì)胞系、菌株和載體
        1.2 常用試劑
        1.3 儀器
        1.4 常用實驗試劑配制
    2 方法
        2.1 NLRP3 敲除靶點的設(shè)計
        2.2 PX459 重組載體的構(gòu)建與鑒定
        2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與NLRP3 基因敲除細(xì)胞株的獲得
第三章 結(jié)果與討論
    1 結(jié)果
        1.1 NLRP3 基因敲除靶點的選擇
        1.2 重組載體的鑒定
        1.3 MDA-MB-231、MCF-7、HEK-293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的檢測
        1.4 嘌呤霉素篩選濃度測定
        1.5 NLRP3 敲除靶點打靶效率檢測
        1.6 PCR及測序鑒定NLRP3 基因編輯情況
    2 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]工程細(xì)胞單克隆篩選及單克隆源性驗證[J]. 江一帆,董靜,魏敬雙.  中國生物工程雜志. 2019(04)
[2]提高CRISPR/Cas9系統(tǒng)靶向編輯效率方法的研究進(jìn)展[J]. 趙盼盼,王麗,袁園園,常衛(wèi)東,王林嵩.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(01)
[3]直接消化法分離單克隆貼壁細(xì)胞[J]. 趙迪誠,龍志高,鄭多,戴和平,夏昆.  湖南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2002(06)



本文編號：3205452